我的样品去哪里了？

2019年3月11日

阅读时间：4分钟

一个非特异性结合（NSB）的案例

我们都经历过这种情况。你在实验室里花了几个小时（有时几天）准备你的样品。你小心翼翼地把它们走到自动进样器前，爱不释手地加载你的样品队列，然后按下播放。当然，你是连夜运行这些仪器，因为仪器的时间很宝贵，明天还有人需要使用它。你早上来到实验室，立即安顿下来，处理你的数据。

而那里什么都没有。

你忘记注射了吗？不是，也许你的分析物根本就没有飙升？你开始怀疑自己的理智了。

"那么，我的样品去哪里了？"

如果你确信你没有犯通常的错误（我们都会犯），而且你知道你的样本应该在那里，但却没有，它去了哪里？

肽和蛋白质特别容易发生非特异性结合（NSB）或吸附在固体表面。这些表面可能是移液器吸头、样品储存容器或注射针头。现在，我们都知道减轻吸附的方法，比如。

使用载体蛋白（这可能会给我们的样品增加不必要的复杂性）或
使用具有高性能表面的实验室用品，以帮助从一开始就阻止吸附的发生。

然而，在许多情况下，我们可能选择不解决这个问题。

您是否准备好在您的样品分析中面对非特异性结合的后果？
这些包括

回收率低
高变异性
敏感度差
线性动态范围不足

让我们进一步研究这些后果。

回收率低

开发多肽的分析方法可能是一个挑战。在LC-MS方法开发过程中，我们经常使用在纯溶液中制备的样品来优化色谱，识别MS片段，并估计检测的线性动态范围。然而，这对多肽来说可能是个问题。例如，Pramlintide（MW 3949.4 Da）是一个大的、疏水的肽，在纯溶液中可以完全失去NSB。更糟的是，观察到的NSB的程度不仅取决于肽，而且还取决于其浓度。如果我们在方法开发过程中不采取措施减轻NSB，我们可能在早上上班时根本看不到分析物信号。或者，我们可能错误地估计了我们的检测方法的可能的检测极限。所有这些都会增加我们一天中的额外时间，而这些时间是我们任何人都不能失去的。

高变异性

如果我们选择不以某种方式打击NSB，我们怎么能确定我们的样本复制是以相同的速度吸附的？或相同的数量？ 我们不能.而这可能导致高变异性。在这个例子中，亮丙瑞德（MW 1209.4 Da）在纯溶液中的回收率只有2%，导致了非常高的变异性，% CV为41.8（N=3）。相比之下，在适当减轻NSB的情况下制备的亮丙瑞林的峰面积CV为1.7%（N=3）。与我们的 "纯溶液 "样品相关的高变异性在任何生物分析检测中都是不可接受的。数据将被拒绝，而且检测的定量下限将高于预期。

敏感性差

由于我们的分析物在低浓度时回收率低、变异性大，我们的检测方法的线性动态范围将受到严重的限制。当开发药代动力学测定时，你需要能够在很大的范围内，并且在可能很低的水平上对你的分析物进行定量。由于这些检测的结果可以指导药物开发的关键决策，我们对我们的量化结果有信心是至关重要的。因此，适当考虑NSB可能是一个成功或失败的检测之间的区别。