L'obscurcissement de la lumière peut ne pas suffire pour détecter les SVP dans votre produit pharmaceutique

Saviez-vous que subvisible particles (SVP) sont la principale cause de rappels de médicaments ? Bien qu'elles soient minuscules, ces particules invisibles ont un impact considérable sur les thérapies biologiques, cellulaires et géniques, non seulement en limitant la durée de conservation d'un produit, mais aussi en compromettant la sécurité des patients. C'est pourquoi les médicaments injectables sont soumis à des exigences strictes visant à garantir leur absence quasi totale de SVP, ce qui nécessite des tests de détection des particules invisibles, une méthode utilisée dans le contrôle qualité pharmaceutique pour détecter et quantifier les particules qui ne sont pas facilement visibles à l'œil nu.

Les chercheurs doivent parfaitement comprendre et maîtriser la stabilité physique à chaque étape du processus de fabrication. Plusieurs facteurs contribuent à l'instabilité et à l'agrégation des produits biologiques, notamment « le cisaillement lié aux opérations de pompage, les températures de stockage sous-optimales, les cycles de congélation-décongélation, les interfaces air-eau et l'exposition à diverses chimies de surface ». Bien que les agrégats puissent varier en taille et en solubilité, les efforts actuels se concentrent sur les particules insolubles et subvisibles de 1 µm à 100 µm, principalement en raison du fait qu'il a été démontré que les particules subvisibles « peuvent provoquer des réponses immunitaires indésirables ».

Recently, USP<1788> was revised to update and improve USP<788>, the primary governing standard for particle analysis of injectables. USP<788> provides an overview of two methods that can be used to determine particulate matter: light obscuration (LO) particle count test and microscopic particle count test. Now, in addition to light obscuration and membrane microscopic methods, USP<1788> provides new guidance on the use of flow microscopy for the determination of particulate matter. USP<1788> revision reinforces the idea that complementary, orthogonal tests must be paired with light obscuration when used alone.

Obscurcissement de la lumière vs comptage microscopique des particules vs microscopie à imagerie dynamique des flux

Le compteur de particules LO est un instrument qui utilise une source lumineuse et un détecteur pour déterminer la taille et la concentration des particules invisibles en suspension dans un échantillon donné. En faisant passer l'échantillon à travers une ouverture étroite, l'instrument mesure le degré d'obstruction de la lumière causé par chaque particule.

Le test de comptage des particules LO est actuellement une technique standard couramment utilisée pour quantifier les particules dont la taille est comprise entre 10 µm et 25 µm, bien qu'il puisse également mesurer des particules jusqu'à 2 µm. Cependant, cette méthode présente certaines limites. Elle ne permet pas de compter avec précision les particules dans les formulations à haute viscosité et a également des difficultés à évaluer les informations morphologiques des particules. Souvent, les particules transparentes et non sphériques ne masquent pas efficacement la lumière et sont donc souvent sous-estimées par cette méthode.

La méthode de comptage microscopique des particules est considérée comme une technique appropriée pour mesurer les particules invisibles à l'œil nu afin d'assurer la sécurité et le contrôle pour une utilisation clinique. Il s'agit d'une méthode de comptage direct qui caractérise chaque échantillon dans son intégralité. Cependant, elle s'est avérée peu performante et produit des résultats d'un ordre de grandeur inférieur à ceux rapportés par l'obscurcissement lumineux.

Une troisième méthode de plus en plus utilisée par les chercheurs pour quantifier et caractériser les particules subvisibles est la microscopie à imagerie dynamique. Cette technique capture des images dynamiques des particules lorsqu'elles traversent une cellule, puis utilise ces images pour calculer la taille, la forme, le nombre et d'autres caractéristiques morphologiques à partir d'une analyse pixel par pixel. Cependant, cette méthode présente également certaines limites. Les systèmes utilisés ont un débit relativement faible lorsqu'ils sont utilisés manuellement, nécessitent un volume d'échantillon élevé compris entre environ 200 et 700 μL et posent systématiquement des problèmes de transfert de particules, d'obstruction ou d'encrassement de la cellule d'écoulement.

En raison de l'importance que cela revêt pour les chercheurs characterize protein aggregates et contrôler leur présence dans les organismes de réglementation, il est nécessaire qu'ils utilisent les outils les plus efficaces pour surveiller les niveaux de particules subvisibles afin de démontrer leur contrôle et leur sécurité. Il existe donc un besoin critique d'une technique fiable, à haut débit et à faible volume pour les tests de particules subvisibles.

L'imagerie par membrane d'arrière-plan offre une alternative à contraste élevé

Imagerie par membrane de fond (BMI) a été spécialement développé comme technique alternative pour la mesure des SVP. À l'instar du test de comptage microscopique des particules, les particules subvisibles d'un échantillon liquide sont isolées sur une surface filtrante afin d'être comptées et analysées au microscope. Le logiciel BMI, Particle Vue Software, image la ligne de base avant l'isolation des particules, puis soustrait cette ligne de base pixel par pixel des particules isolées afin que seules les informations photographiques provenant de l'isolat restent.

Cette technique a été développée sur Aura System, le premier système permettant de tester les particules à la fois au début du développement et plus tard lors du contrôle qualité. Grâce à Aura System, vous pouvez déterminer si une particule provient du médicament lui-même, d'un ingrédient présent dans le liquide qui s'est séparé de la solution, d'un contaminant externe ou même d'une cellule. BMI réinvente l'imagerie membranaire grâce à la robotique moderne, au traitement d'images et à une optique novatrice dans un format de plaque filtrante à 96 puits qui fonctionne comme un lecteur de plaques.

Conclusion

Lors du développement de protéines thérapeutiques, il est essentiel de comprendre et de contrôler la stabilité physique à toutes les étapes du processus de fabrication. Les fabricants de médicaments ne peuvent pas se contenter de normes minimales lorsqu'ils commercialisent un produit : les particules doivent être entièrement caractérisées à chaque étape. Et bien que la LO soit une méthode efficace, les utilisateurs ne doivent pas se fier uniquement à cette technique. L'utilisation du BMI avec la LO garantira une plus grande sécurité et un développement plus rapide des traitements thérapeutiques essentiels, afin d'aider les patients qui en ont besoin.

Aura Systems generate accurate USP<788> compliant subvisible particle data, perfectly complementing light obscuration so drug producers have complete coverage of all particles of interest including subvisible particle testing.

Pour bénéficier d'une caractérisation complète des particules sans les inconvénients liés au LO, passez dès aujourd'hui au système Aura. En savoir plus sur Aura PTx System.