网络研讨会亮点。量化口服液中的大麻素以确定吸食大麻后的驾驶损伤

沃特工作人员

阅读时间：8分钟

使用ACQUITY UPLC I-Class/Xevo TQ-S微型质谱系统对口腔液中的大麻素进行定量的网络研讨会问答

沃特玛法医团队最近赞助了一场网络研讨会，讨论使用口腔液定量分析进行法医毒理学和驾驶损伤的优势。该网络研讨会由加利福尼亚大学临床化学研究员Philip Sobolesky博士主持。

以下是网络研讨会结束时提出的问题的回顾，由于时间不允许，大部分问题没有得到现场回答。

重播网络研讨会的需求

你提出的提取效率是针对HLB板，还是Quantisal设备？校准品和对照品在SPE前是否也作为病人样本在Quantisal设备中被提取？你是否对你的校准物进行了短期或长期的稳定性评估？

我提出的提取效率是针对HLB板的。我做了一些小实验，检查了定量装置中分析物的回收率，我的结果（严格来说是由于装置造成的约30%的损失）与之前公布的数值相符（M. Fabritius, C. Staub, P. Mangin, C. Giroud, Analysis of cannabinoids in oral fluid by liquid chromatography-tandem mass spectrometry, in:Forensic Toxicol., 2013: pp. 151-163. doi:10.1007/s11419-012-0168-z.）。

到目前为止，我们已经证明，在从冷冻库中解冻10次后，校准品和质控品没有明显的影响（>20%的变化）。长期稳定性研究仍在进行中，校准品和质控品的1年稳定性得到验证。

不同品系的大麻含有不同的大麻素特征。这种测试如何避免对高浓度的比如说CBN（一种通过时间热和光降解大麻素的分子）产生偏见？如果说CBN被用作一个指标，人们可以说这不是一个以随时间变化的方式来确定损伤的准确手段。

有人可以说，由于CBN的高降解性，它不是一个好的指标，但我们还没有看到一个病人的CBN水平高于相应的THC浓度。因此，当我们的数据最终确定时，最有可能的是（>x）THC浓度将与损害有关，并可通过存在（y）CBN浓度进一步确认。

此外，在引入食物摄入后，结果是否有所改变？(你提到有一个午休时间。)高血糖水平是否会在准确性和精确性方面造成任何问题？

到目前为止，我们还没有发现午餐后有任何可能表明饮食干扰的异常结果，然而我们也没有在任何时间点测量血糖。所以很难回答你的问题，因为没有进行调查研究，研究葡萄糖对大麻素浓度的干扰。

我看到以前的Waters应用数据，在Quantisal缓冲液中加入乙腈（我想是1毫升）。这似乎有助于提高回收率。对此有什么评论吗？你是如何得到1毫升4%的磷酸的？

我在1mL OF/缓冲液中加入0.4mL 4%的H3PO4，因为之前的验证研究使用了这个量。此外，在磷酸中加入分析物是Oasis Prime SPE的标准做法，所以我没有在这一步进行任何优化。(M. Fabritius, C. Staub, P. Mangin, C. Giroud, Analysis of cannabinoids in oral fluid by liquid chromatography-andem mass spectrometry, in:Forensic Toxicol., 2013: pp. 151-163. doi:10.1007/s11419-012-0168-z.）。

据报道，口腔液中THC-COOH的浓度为皮克/毫升。 这似乎与收集器的缓冲液无关。也就是说，原始的口服液和基于缓冲液的收集器仍然提供非常低的THC-COOH浓度。你同意吗？

我知道文献中有关于口服液中THC-COOH约为15-450皮克/毫升的报道。我知道，在这项研究中，我们无法达到这么低的LOQ，而且也不相信许多实验室能够达到这个LOQ。因此，尽管一些实验室可能能够将定量降低到15皮克/毫升，但这种水平的灵敏度需要额外的处理和操作，导致缺乏实用性。

你能重复一下，除了血液、口腔和呼吸之外，研究中还考察了什么？DRE、iPad分心，还有什么？

正在对口服液中的10种大麻素进行量化，血液中的8种大麻素和呼吸中的四氢大麻素进行量化。参与者通过驾驶模拟器、基于iPad的性能和盲目的警察DRE考试进行评估。服从口头命令的情况也被评估（即在第三个绿灯后，向左转）。

是否评估了液体提取或稀释和拍摄？

没有--但这些样品预处理方法在其他实验室已经尝试过了。 由于商业口服液设备中稳定剂和表面活性剂的存在，稀释和拍摄将不起作用，会导致非常高的离子抑制。当口腔液被收集在商业设备中时，液体提取也不能成功地减少离子抑制。

测得的损伤与血液/唾液中的大麻素水平之间有什么关联？你的研究是否已经研究过这个问题，还是以后才会研究？

这将在本研究结束时进行，一旦我们有120名完成数据的参与者，我们将取消盲目性，然后能够评估所测量的任何大麻素的浓度与损伤有关。

你如何确保你提供给参与者的大麻素浓度的一致性？变化的范围是什么？

这些大麻是由UCSD医疗中心的药剂师卷起来的。统计员告诉药剂师使用哪种类型的大麻（即安慰剂、5.9％或13.4％四氢大麻），然后交给项目协调员，由他把大麻送到病人手中。因此，只有统计员知道哪个参与者得到了什么类型的大麻。不同类型的大麻的卷装量是相同的。

你如何将所有参与者的大麻使用背景纳入研究中？你打算如何解释结果？

我们只招收长期用户（每天）和偶尔用户（每周>3次）进入我们的研究，以减少天真的用户偏差。目前，我不知道我的合作者将如何处理用户背景的差异。

该药物在口腔液样本中的传播情况如何？我们在两个不同的试管中收集了两个不同的样本，其中一个检测为阳性，另一个检测为阴性，你能解释一下吗？

我们没有收集到足够的数据来真正评论药物在口腔液样本中的扩散，但我们看到吸烟后的THC含量从15纳克/毫升->4000纳克/毫升不等。假设你说的是两个不同的设备，那么专有的缓冲器有可能造成了你的偏差。

如果口服液样品中有一种代谢物而没有母体药物，将如何解释？

到目前为止，我们对潜在的样本解释没有任何猜测，但话虽如此，我们还没有出现过口服液中四氢大麻酚阴性而代谢物阳性的样本。因此，要猜测这可能意味着什么，可能是非常罕见的情况。

为什么你认为THCA-A在汉密尔顿注射器上有如此高的保留率？

对于THCA-A在汉密尔顿注射器上的高度保留，我没有一个好的答案。我们选择不调查原因，而是执行一个解决方案（即改用一次性移液器吸头）。

对于汉密尔顿注射器的残留物，你是否尝试过用其他溶剂如氯仿来清洗？

不，我们没有尝试用氯仿或其他非极性有机溶剂清洗。

关于是什么原因导致了（例如）"精力充沛 "与 "坐立不安 "的品系，还有很多未知数。这些因素（例如，萜类化合物）肯定会影响驾驶能力。 你如何控制这种可变性？

解决这个问题是很困难的，因为摄取植物材料需要采用多药联用的方法（即多种因素引起的反应，很难只由一种化合物造成）。然而，大麻的精神活性成分是四氢大麻酚，因此，不管其他促成因素如何，如果四氢大麻酚最终与OF在某种程度上的损害有关，那么我们希望这在不同的植物品系中都能成立。这是一个复杂的问题，但未来对植物品系的分析研究是一个需要更好地规范和控制的课题，以找出潜在的损害作用。

在iPad上评估的是什么类型的任务？

iPad的任务是确定受试者是否有能力选择比其他所有泡泡都大的泡泡。选择正确的气泡所需的时间将被评估。

我们的小组测量急性使用的视网膜功能/视力，但没有能力确定生物制剂。在我们有限的数据集中，我们发现了 "植物 "差异。我们以前对AD和PD的研究表明，片剂神经测试的错误往往反映了视觉功能障碍而不是认知功能。 你们测量众多大麻素的方法和能力将是很重要的。 你是否有办法确定非认知功能？

在评估注意力时，会给受试者一些口头命令，这些命令不会受到视力障碍的影响。这方面的项目是由我在心理学系的合作者监督的，由于我在这一领域的研究经验有限，所以最好向他们提出。

较早的视觉研究（70年代在伯克利）发现峰值和消散曲线与你类似，即在10-15分钟左右达到峰值，1.5小时后消散。这些是对视网膜眩光的功能测试。是否有任何功能测试与这些峰值和消散曲线相匹配？

我对任何功能测试仍然是盲目的，我的合作者对任何实验室数值也是盲目的，直到研究结束。

急性吸食大麻时，听力和视力会出现障碍。Huestis报告了隧道现象--但迄今没有确定的研究。 我们正在发现隧道现象。在今年的ARVO会议上进行了报告。

我对任何功能评估、模拟器和DRE考试结果都是保密的。

那么，如果NIH，在CBD的限制呢？CBD能得到的最大限度是什么？

由于我们从政府那里获得大麻，所以我们能够测试的品种和效力是有限的。我不知道从NIH获得的CBD的最大数量是多少。

你是否考虑过使用时间转移法，然后看一下血液和OF之间的相关性？例如，如果化合物在15分钟后被吸收，就用15分钟的血液与零时口服？

不，我们目前没有考虑对我们的数据进行任何时间转移。数据分析将在研究结束时进行，一旦我们对病人进行分层（即受损与未受损；或安慰剂与低THC与高THC；等等），相关关系就有可能改善。

为什么只有氘化的IS？   

氘代内标通常用于大麻素代谢物。13C内标也有可能被使用。

 

不要忘记查看网络研讨会的点播情况。

 

了解更多关于沃特世的技术 forensic toxicology 应用。