用样品处理和制备的关键方法控制分析方法的变异性

沃特工作人员

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样品处理和制备对分析方法的变异性和数据质量有很大影响。 作为方法开发过程的一部分，考虑并解决与样品制备相关的风险是很重要的。 这需要精心设计和执行实验，并在方法中明确记录，以便给分析人员一个有效的分析控制策略。通过适当的技术，选择可重复的消耗品和方法生命周期的方法，包括分析目标概况（ATP）、风险评估（RA）和分析控制策略（ACS），分析人员可以有效地减少风险，提高他们分析方法的稳健性。

样品制备是分析方法的一个组成部分，往往是最耗费时间的步骤。 方法的稳健性和转移问题经常是由样品制备的问题导致的。1即使是经过深思熟虑设计的LC分析方法，也可能由于在色谱分离之前就发生的一些常见错误而产生不良结果。通过正确的技术、选择经认证的清洁、可重复的消耗品和方法生命周期方法，如创建分析目标档案、进行设计分析质量（AQbD）风险评估和实施适当的分析控制策略，分析人员可以减少方法失败的风险。

这里有一些 涵义通过减少样品处理和制备中的错误来帮助控制方法的变异性。

1.创建一个分析性目标档案（ATP）

ATP确定了关键的方法要求，建立了评估样品处理和准备步骤的接受标准。 ATP应包括方法允许的准确性、精确性、特异性和敏感性要求，因为这些将影响可接受的样品制备。 关于建立方法的分析目标概况的更多信息，见"定义分析目标概况"，制药工程，2

2.进行AQbD样品处理风险评估

通过评估分析前与样品相关的每个步骤（如通过HPLC），进行样品处理风险评估。 考虑每个步骤如何影响分析结果。

  1. 确保样品或标本在要检查的批次中具有代表性。这通常是通过统计方法来实现的。
  2. 保持样品的完整性，正确标记样品并保护其不受环境因素如光线、水分、空气、温度和微生物污染的影响。
  3. 批量的均匀性也可能是一个问题，因此必须考虑片剂的含量均匀性，或沉淀对悬浮液的影响。
  4. 一旦确定了风险因素，控制方法风险的一个关键步骤就是指定低风险耗材。例如，选择合适的样品瓶可以将机械影响（如针头卡住）、污染物峰和分析物的吸附损失降到最低。请参考 用适合的高质量玻璃瓶控制色谱分析中与方法相关的数据质量风险3 了解更多细节。 此外，创新的技术已经被设计出来，通过最大限度地减少可能导致样品损失的分析物表面相互作用来提高分析物的回收率和可重复性。参见 使用QuanRecovery玻璃瓶和玻璃板实现最大的蛋白质和多肽回收率、灵敏度和重现性4 了解更多信息。
  5. 选择适合所选稀释剂的移液器吸头和尽量减少吸附损失的过滤器也能降低风险。
  6. 最后，被认为对方法的成功很重要的因素，包括消耗品，应该作为分析控制策略（ACS）的一部分明确记录在方法中，并期望它们不会被改变，除非有明确的理由来替代。

3.用正确的技术解决关键的风险因素

一旦样品进入实验室，有许多潜在的挑战使样品准备好进行色谱或光谱分析。 这些挑战包括样品的均匀性、稀释剂的选择和提取技术。 对于片剂来说，如果研磨或称重，得到的颗粒应该是相当均匀的。 同样，悬浮液在取样前必须充分混合，以确保溶液的代表性。从基质中提取分析物可能是最关键的步骤之一，因为它受分析物在稀释剂中的溶解度以及混合类型和时间长度的影响。稀释剂应根据分析物的溶解性实验来选择。

为了使一个方法表现稳定，混合应该有很好的特征（混合的类型、持续时间、速度等）。分析用溶液的制备通常涉及称重、移液或稀释步骤，通常使用容量瓶。 这指出了对实验室科学家进行良好培训和实验室能力演示的重要性。 此外，可能需要评估各种样品的重量和体积，以确保可报告的结果符合ATP中规定的准确性和精确性标准。 这些实验的结果应记录在方法开发报告中。 就该方法常规应用的可接受的实验参数而言，其结果应作为ACS的要素记录在该方法中，并期望在没有适当理由的情况下不会被改变。

4.萃取后的考虑因素

有时被忽视的一个方面是分析溶液的过滤过程。 过滤对于去除颗粒是必要的，但它可能会产生意想不到的效果，如分析物的吸附性损失。除了选择适当的过滤产品外，这种影响可以通过丢弃前几毫升的滤液来克服，这个体积应根据经验来确定。 最后，评估分析溶液的稳定性是很重要的。 各种因素，如光、温度和时间，都可能导致溶液的变化，如分析物的损失或降解物的增加。 溶液的稳定性应作为方法开发过程的一部分进行调查，并作为ACS的一部分记录在方法中。

5.样品制备和方法稳健性

即使有一个完善的方法，我们也可以看到每天、分析员与分析员、实验室与实验室之间的差异。 由同一分析员或不同分析员在多日内对同一样品进行的实验，可用于评估预期的变异性。 如果变异性相对于ATP中规定的要求较高，可能有必要进一步调查以了解其来源。也许最大的挑战是将方法转移到另一个实验室。 如果最初的转移实验不成功，可能需要仔细审查现有的ACS，并有可能回到AQbD RA，特别强调那些在接收实验室可能不同的要素。

6.创建并实施分析性控制策略

当与各种风险因素有关的变异性来源被确定，并且对程序、消耗品和试剂的实验控制已经建立，这些就构成了分析控制策略（ACS）。 分析控制策略应在方法中得到很好的记录，以保证应用的一致性，包括对试剂和设备的控制。 关于分析控制策略的进一步指导，见分析控制策略 Elisabeth Kovacs等人，USP PF 42(5) 修订过程的刺激因素5。

样品处理和制备对分析方法的变异性和数据质量有很大影响。 作为方法开发过程的一部分，考虑并解决与样品制备相关的风险是很重要的。 这需要精心设计和执行的实验以及方法中明确的文件，给分析人员提供一个有效的分析控制策略。通过适当的技术，选择可重复的消耗品和方法的生命周期方法，包括分析目标概况、风险评估和分析控制策略，分析人员可以有效地减少风险，提高其分析方法的稳健性。

参考文献。

  1. 药品剂型的样品制备。 样品制备和提取的挑战和策略》，Beverly Nickerson，第vii页，AAPS出版社，2011。
  2. 定义分析目标概况，制药工程，Kimber Barnett, Stephen Chestnut, Neil Clayton, Michael Cohen, Janice Ensing, Timothy Graul, Melissa Hanna-Brown, Brent Harrington, James Morgado。2018年4月。或使用分析目标简介来驱动分析方法的生命周期。Anal.Chem.2019, 91, 4, 2577-2585.Patrick Jackson, Phil Borman, Marion Chatfield等人，2019年1月。
  3. 使用适合目的的高质量玻璃瓶控制色谱分析中与方法相关的数据质量风险 ，Tran Pham和Markus Wanninger。2020年1月。沃特世公司白皮书。
  4. 使用QuanRecovery小瓶和平板实现最大的蛋白质和多肽回收率、灵敏度和可重复性 ，Moon Chul Jung。2019年5月。沃特世公司白皮书。
  5. 分析控制策略，Elisabeth Kovacs等人，USP PF 42(5) 修订过程的刺激因素。