Más allá del procedimiento operativo estándar: un nuevo enfoque de la uniformidad en los ensayos de endotoxinas

¿Y si una preparación de muestras más sencilla contribuyera a que los análisis de endotoxinas fueran más uniformes, sin que ello afectara al rendimiento?

En un seminario web reciente, Guillaume Mignard, de Waters, y Paola Vigilanza, doctora, y Luca Di Bello, de bioMérieux, mostraron cómo simplificar los ensayos de endotoxinas combinando placas de ensayo listas para usar con la preparación automatizada de muestras. En el seminario web se abordaron la simplificación de los ensayos, la preparación estandarizada y la ejecución trazable.

También podrás consultar los datos de rendimiento de los ensayos, revisar los requisitos del robot Andrew+ y OneLab Software configuración del flujo de trabajo y analizar aspectos prácticos para la implementación de este enfoque en un laboratorio de control de calidad.

Dónde se introduce la variabilidad en el flujo de trabajo

Es imprescindible disponer de una curva de calibración válida, pero esto no garantiza que haya desaparecido toda la variabilidad dependiente del operador.

Incluso cuando los analistas siguen el mismo procedimiento escrito y utilizan los mismos reactivos, placas y muestras, las pequeñas diferencias en la ejecución manual pueden seguir introduciendo variabilidad. Las diferencias en la técnica de pipeteo, la sincronización y la manipulación pueden contribuir a la variación de los coeficientes de variación y de los parámetros de la curva estándar, incluidas la pendiente y la ordenada en el origen.

La preparación de la curva de calibración hace que esta distinción resulte especialmente evidente. La reconstitución de las endotoxinas, la preparación de diluciones en serie y la transferencia de los patrones suponen una serie de pasos sucesivos, además de la preparación de los controles negativos y los controles positivos del producto (PPC). Cada uno de ellos supone una nueva oportunidad de que se produzcan variaciones. Dado que el rendimiento de la curva ayuda a determinar la validez del ensayo, un fallo puede obligar a repetir las pruebas en toda la placa, lo que tiene consecuencias en cuanto al tiempo del analista, la disponibilidad de los instrumentos y la carga de trabajo de la investigación.

Cuando el trabajo manual se convierte en un cuello de botella

Estas vulnerabilidades analíticas deben gestionarse en un laboratorio con gran volumen de trabajo. Las muestras pueden llegar al mismo tiempo mientras los analistas se ocupan de otras prioridades, y el pipeteo repetitivo requiere una atención constante. Una interrupción puede dificultar determinar qué trasvases ya se han completado. Por lo tanto, el aumento de la demanda plantea un reto tanto en cuanto a la capacidad del personal como al rendimiento: el laboratorio necesita analistas debidamente formados y disponibles para realizar el trabajo. El pipeteo intensivo también puede suponer una carga ergonómica.

La encuesta inicial realizada a los asistentes al seminario web reflejó esta combinación de preocupaciones, que englobaba la variabilidad de los operadores, los flujos de trabajo manuales, la integridad de los datos y la capacidad. En lugar de tratarlas como problemas independientes, el debate se centra en cómo se puede rediseñar el propio flujo de trabajo. El objetivo no es simplemente trasladar las tareas manuales existentes a una plataforma automatizada, sino eliminar primero la complejidad evitable.

Simplifica antes de automatizar

El ensayo constituye el punto de partida. El factor C recombinante (rFC) detecta la endotoxina sin necesidad de recurrir a la sangre de cangrejo herradura. La endotoxina activa el rFC, que escinde un sustrato fluorogénico; la fluorescencia resultante se cuantifica mediante una curva de calibración. Esto supone un cambio en el enfoque de los reactivos, pero sigue siendo importante una preparación cuidadosa y que las muestras sean adecuadas.

Las placas listas para usar ENDONEXT ENDOZYME® II GO de bioMérieux simplifican la preparación gracias al material liofilizado de la curva de calibración y a los PPC ya cargados. Esto reduce la manipulación manual de los estándares de control asociada a los flujos de trabajo convencionales. Además, cambia la pregunta que hay que plantearse sobre la automatización. En lugar de reproducir cada dilución y cada transferencia, ¿qué pasos restantes se beneficiarían más de una ejecución controlada?

Estandarizar la preparación mediante la automatización

Dentro del ecosistema de software de Waters OneLab, the Andrew+ Robot automatiza los pasos de preparación de placas que quedan tras la simplificación del ensayo. La simplificación elimina pasos y la automatización controla su ejecución, lo que contribuye a que la manipulación repetitiva de líquidos dependa menos de la técnica y el tiempo de cada persona, al tiempo que se mantiene la realización de ensayos en placas multipocillo.

Incorpora la trazabilidad en cada ciclo de producción

En el control de calidad, la reproducibilidad requiere pruebas de cómo se ha ejecutado un flujo de trabajo. El software OneLab vincula la ejecución de los protocolos con los informes de los experimentos, las marcas de tiempo, los registros de los dispositivos, los registros de auditoría y la información sobre la ubicación de las muestras, además de los flujos de trabajo de firma electrónica.

En conjunto, estos registros permiten hacer un seguimiento de las actividades de preparación y ayudan a los laboratorios durante las auditorías, al ofrecer un informe claro sobre la ejecución del flujo de trabajo.

El siguiente paso hacia unos análisis de endotoxinas más fiables

Elegir un flujo de trabajo BET implica tener en cuenta de forma conjunta la idoneidad del método, los requisitos aplicables y los costes de funcionamiento. Esta evaluación te ayuda a centrar la automatización en aquellos aspectos en los que puede reforzar el control de la preparación y mejorar la coherencia.

¿En qué aspectos de tu laboratorio podría suponer una mayor diferencia la simplificación de los preparativos? Analizar conjuntamente la preparación de los ensayos, la manipulación de líquidos y la documentación ayuda a identificar en qué ámbitos una ejecución controlada puede aportar valor añadido. Los conocimientos científicos siguen siendo fundamentales a la hora de decidir cómo esos cambios pueden contribuir a que los análisis rutinarios sean más consistentes.

Mira el seminario web para ver el flujo de trabajo en acción.