바이오 접합체는 표적 분자 설계를 통해 강력한 페이로드의 정밀한 전달을 가능케 하며, 차세대 치료제 분야에서 점차 핵심으로 자리 잡고 있습니다. 복잡하고 불균일한 분자를 최적화하기 위해서는 접합 부위, 페이로드 분포, 전반적인 분자의 불균일성 등 중요 속성을 완벽하게 특성화할 수 있는 강력한 분석 기술이 요구됩니다.
바이오 접합 분자가 신약 발굴에서 상용화 단계로 개발이 진행됨에 따라, 이러한 물질이 지닌 구조적 다양성과 복잡성은 분석에 있어 상당한 난제로 작용하고 있습니다. 안전성, 효율성 및 일관된 제품 품질을 보장하기 위해서는 포괄적인 특성화가 필수적입니다.
Waters는 용도에 맞는 솔루션을 제공하여 바이오 접합체의 구조와 품질에 대한 심층적인 인사이트를 제공합니다. 바이오 접합체 구조에 관계없이 복잡한 분자 분석을 단순화하고 중요한 품질 속성의 특성화 및 모니터링을 가속화할 수 있습니다.
사례 연구: Waters의 혁신 치료제 개발 지원 사례
바이오의약품용 waters_connect를 사용하면, 접합 비율 및 분포에 대한 통합 자동 계산 기능을 갖춘 바이오 접합 분석용으로 설계된 맞춤형 워크플로를 통해 샘플 분석에서 의사 결정에 이르기까지의 여정을 가속화할 수 있습니다.
빠르고 효율적인 분리를 위해 Waters Protein-Pak Hi Res HIC(소수성 상호작용 크로마토그래피) HPLC 컬럼을 사용하여 고품질 LC 기반 분석을 수행하고 시스테인 결합 ADC와 소수성이 높은 ADC의 DAR을 측정할 수 있습니다.
ACQUITY 및 XBridge Premier Protein BEH C4 컬럼과 같은 MaxPeak HPS 바이오 접합체 및 항체 약물 접합체(ADC)용 역상 컬럼은 ADC와 컬럼 하드웨어 간의 2차 상호 작용을 최소화하도록 고유하게 설계되었으며 라이신 결합 ADC의 분석에 적합합니다. 시스테인 결합 ADC와 달리, 라이신 결합 ADC에 대한 mAb의 중쇄와 경쇄 사이의 연결을 유지하는 사슬 내 이황화 결합은 손상되지 않습니다. 따라서 역상 크로마토그래피는 링커 케미스트리가 산성 pH에서 불안정하지 않은 경우 라이신 결합 ADC의 분석에 적합합니다. 또한 Waters는 도메인 수준에서 연결된 약물의 국소화를 결정하기 위한 Intact 및 Subunit 분석용 BioResolve RP mAb Polyphenyl과 같은 고체 코어 입자 기술을 갖춘 역상 컬럼을 제공합니다.
Waters SEC 컬럼에서 일관되게 정확한 응집체, 단량체 및 단편 데이터를 얻기 위해 인산 완충 식염수(즉, PBS)를 사용하는 플랫폼 분석법(Platform method)를 사용하면 서로 다른 단백질을 위해 여러 SEC 용리액 이동상을 준비할 필요가 없습니다. 또한 소수성으로 인해 원치 않는 2차 상호작용을 일으킬 수 있는 바이오 접합체의 경우 MaxPeak Premier Protein SEC 컬럼 및 PEO 결합 BEH 입자를 사용하여 유기 용매를 추가할 필요가 없습니다.
BioResolve SCX mAb 컬럼 및 BioResolve CX pH 버퍼 농축액을 사용하여 광학검출에서 2차 상호 작용을 최소화하면서 염 또는 pH 기울기에 대해 시스테인 결합 ADC 및 라이신 결합 ADC의 전하 변이체 프로파일을 정확하게 측정합니다. 이온 교환에서 질량분석에 대한 구조적 통찰력을 제공하기 위해 당사의 MS 호환 버퍼인 IonHance CX- MS pH 버퍼 농축액은 질량분석에 적합한 고순도, 휘발성 버퍼를 갖춘 온라인 IEX-MS를 가능하게 합니다.
항체 올리고뉴클레오타이드 접합체(AOC)는 단백질 진단에 일반적으로 사용되며 표적 세포 치료를 위한 유망한 치료제입니다. AOC의 순 음전하는 각 접합 부위마다 확장되어 음이온 교환 수지에 대한 머무름이 증가합니다. GenPak FAX 컬럼에는 단백질 및 올리고뉴클레오타이드 샘플에 대해 제어된 머무름성과 고유한 선택성을 나타내는 약한 음이온 교환 흡착제가 포함되어 있습니다. 최근 응용 연구에 따르면 AEX를 MALS와 결합하여 절대 분자량 정보를 생성할 수 있습니다.
HILIC(Hydrophilic Interaction Chromatography)는 작은 극성 화합물 분리에 널리 사용되었지만, 놀랍게도 분리된 글라이칸 이외의 대형 바이오 분자에 대한 적용은 제한적이었습니다. 이제 Waters의 넓은 기공 Glycoprotein 컬럼을 사용하면 인텍프로테인(글리코실화 유무와 상관 없이), 단백질 조각, 복잡한 Released 글라이칸으로부터 이전에는 얻을 수 없었던 정보를 수집할 수 있습니다.
수동 또는 자동 워크플로를 위한 Waters PeptideWorks 트립신 단백질 분해 키트는 평균 자가 추출 방법보다 4배 더 빠른 2.5시간 이내에 재현성 있는 고효율 펩타이드 맵을 제공합니다. 1:5의 효소:펩타이드 비율로 30분 내에 분해할 수 있으며, 절단 누락이 78% 감소되며 오염된 자가 분해 피크가 98% 감소됩니다. PeptideWorks는 약물 결합 부위 측정, 단백질 구조 특성화, 단백질 식별 및 전사 후 변형을 포함한 단백질 변형 모니터링에 이상적입니다.
GlycoWorks 키트를 사용하여 ADC의 N-glycan을 프로파일링하는 간소화되고 빠르며 감도가 높은 방법을 새롭게 구상하세요. Waters Andrew+ 피펫팅 시스템에서 자동화 솔루션으로 생산성을 높이는 동시에 분리된 N-glycan 분석에서 전례 없는 형광 및 질량분석 성능을 달성할 수 있습니다. GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glycan 키트를 사용하면 복잡하고 시간 소모적인 샘플 전처리를 3단계의 30분 과정으로 단축할 수 있습니다.
ProteinWorks eXpress Digest 키트로 단백질 분해를 간소화하고 가속화하세요. 혈장 및 혈청에서 ADC를 포함한 단백질의 정확하고 정밀하며 감도가 높은 LC-MS 정량을 위해 사전 측정되고 로트 추적이 가능한 시약 및 표준화된 프로토콜을 제공합니다. 단백질 바이오분석/DMPK를 비롯한 다양한 워크플로에 최적화된 키트로 재현성 있는 단백질 분해를 위한 탁월한 성능과 유연성을 확보해 보세요.
MaxPeak Premier 기술이 적용된 Waters BioResolve Protein A Affinity 컬럼을 통해 항체 역가의 측정을 가속화할 수 있습니다. 고성능의 컬럼으로 최대 7배 더 높은 감도를 제공하므로, 더 빠른 의사 결정과 우수한 공정 제어를 가능하게 합니다. 이러한 컬럼을 통해, 간소화된 Direct Connect 2D ProA-SEC 및 ProA-MS 분석법을 포함한 고급 분석 워크플로도 활용할 수 있습니다. 프로세스를 간소화하고 항체에 대한 전례 없는 심층적 인사이트를 확보할 수 있습니다.
변동성을 줄이고 추적성을 개선하며 분석법 전환을 간소화하는 검증된 워크플로를 통해 정량 LC-MS 분석을 위한 샘플 전처리를 간소화하세요.
Waters 글로벌 서비스를 통해 피크 시스템 성능을 유지하고, 가동 중지 시간을 줄이며, 응용 과제를 해결하고 엄격한 규제 준수 요구 사항을 준수함으로써 실험실의 생선성과 성공 가능성을 개선하세요.
노후 장비 업그레이드, 맞춤형 지원 이용, 월간 결제 요금에 서비스 번들화 등 Waters Capital의 결제 옵션을 이용하여 리소스를 충분히 활용하고 위험을 감소하세요.
HIC를 이용한 시스테인 결합 ADC 분석. 약물 부하가 증가함에 따라 세 가지 서로 다른 시스테인 접합 ADC 샘플에 대해 약물 분포를 평가했습니다.
BioAccord 시스템에서 네이티브(위) 및 높은 DAR mAb(아래)에 대해 수집된 가우스 맞춤 DSC ADC 결과.
XBridge Premier Protein SEC 250Å 2.5µm 4.6 x 150mm 컬럼에서 수행된 트라스투주맙 엠탄신(A) 및 베바시주맙(B)의 고속 SEC 분석. 이동상: 1x PBS, pH 7.4, 유속 F = 0.7mL/분, 온도 T = 25°C, 주입 부피 1μL, 검출: 280nm(UV).
결합 및 비결합 트라스투주맙의 펩타이드 맵핑(UV 크로마토그램) 비교
위: 트라스투주맙 바이오시밀러 트립신 분해.
아래: 트라스투주맙 엠탄신(Kadcyla), 항체 약물 접합체 트립신 분해.
두 트립신 분해 모두 XSelect Premier Peptide CSH C18, 2.5µm, 2.1 x 150mm 컬럼에 100µL 주입(~ 10µg)으로 RapiZyme Trypsin 및 PeptideWorks Tryptic Protein Digestion 키트를 사용했습니다. 비결합 트라스투주맙(위)과 비교하여 Kadcyla 크로마토그램(아래)에서 관찰된 추가 피크.