オリゴヌクレオチド精製カラムおよび消耗品

オリゴヌクレオチド精製カラムおよび消耗品

ウォーターズのラボスケールのオリゴヌクレオチド分取カラムおよび消耗品が、高回収率でハイスループットな精製の卓越した直接スケールアップを迅速に行うのにいかに役立つかについて説明します。業界トップクラスの pH 耐性および温度耐性を持つ吸着剤の各バッチは、ロット間の性能の一貫性と再現性を確保するために、ウォーターズのオリゴヌクレオチド標準試料を使用して QC テストされ、選択されています。

ウォーターズのラボスケールのオリゴヌクレオチド分取カラムおよび消耗品が、高回収率でハイスループットな精製の卓越した直接スケールアップを迅速に行うのにいかに役立つかについて説明します。業界トップクラスの pH 耐性および温度耐性を持つ吸着剤の各バッチは、ロット間の性能の一貫性と再現性を確保するために、ウォーターズのオリゴヌクレオチド標準試料を使用して QC テストされ、選択されています。
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Learn how to achieve high performance oligonucleotide preparative chromatography by utilizing XBridge Oligonucleotide OBD Prep Columns and efficient method optimization considerations
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概要

完全長オリゴヌクレオチド生成物を合成中に生じる不純物から精製することは、医薬品アプリケーションおよび診断アプリケーションにおける機能、安全性、有効性を確保するために不可欠です。オリゴヌクレオチドは、そのポリアニオン性の性質のため、高い選択性と分離能で精製するのは困難です。イオン逆相クロマトグラフィー（IP-RP）が有力な推奨手法として登場しました。

pH/温度安定性が高く、二次的相互作用のレベルが制御されているバッチテスト済みのカラムが、時間がかかるボトルネックを迅速に解消するのに役立ちます。Waters XBridge Oligonucleotide BEH C18 Optimal Bed Density（OBD）カラムは、分取カラムの優れた選択肢であり、複雑な化学修飾を有するさまざまなオリゴに対して、保証された性能、一貫した拡張性、高回収率での精製が実現します。

  • バッチテスト済みで QC 認証済みのオリゴヌクレオチド用 BEH C18 粒子により、さまざまなカラム径にわたって、予測可能なスケールアップと一貫した精製が行える
  • BEH C18 ハイブリッドシリカパーティクルテクノロジーにより、業界トップクラスの pH 安定性および温度安定性が実現し、卓越した分離とカラム寿命が得られる
  • MaxPeak Premier High Performance Surfaces（HPS）テクノロジー（内径 10 mm のカラムで利用可能）により、非特異的吸着が低減し、感度、再現性、生産性が最大化するというさらなる選択肢が得られる
  • 高品質でロット追跡可能な一連の分析用標準試料により、システム適合性試験、分析法開発、トラブルシューティングが容易になる
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Webinar：RNA 精製の技術：長鎖修飾オリゴヌクレオチドの拡張性と収率を改善するための分析法に関する検討事項

合成オリゴヌクレオチドの精製を分析から分取にスケールアップする分析法

合成オリゴヌクレオチドの精製を分析から分取にスケールアップする分析法

この Webinar では、精製および分析における主要な課題において、以下の点に焦点を当てて対処します。

  • 複雑な RNA の拡張性と回収率の向上
  • 分析から分取までの IP-RP 分析法の最適化に関する検討事項
  • さまざまなプラットフォームでのセミ分取スケールの精製用の柔軟なアプローチ
オンデマンドで視聴する
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最適ベッド密度充塡

最適ベッド密度充塡

縦横比が小さい分取カラムの場合、粒子が小さい高圧スラリー充塡では、適切に設計された分析カラムに必要なベッド密度に到達できないことがよくあります。インレットでの軸圧縮が強すぎると、粒子の破損、チャネリング、ベッドの透過性低下が起きることがあります。慎重に設計された OBD カラムでは、カラム寿命の延長、効率の向上、ピーク形状の改善、背圧の低減など、大きなメリットが得られます。

内径 10 mm の MaxPeak High Performance Surface カラム

内径 10 mm の MaxPeak High Performance Surface カラム

オリゴヌクレオチドなどの核酸は、ポリアニオン性（負に荷電）であるため、ステンレススチール製カラムの金属酸化物表面にすぐに吸着します。Waters XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD カラムは、核酸の非特異的吸着（NSA）が大幅に低減する不活性な有機/無機ハイブリッドシリカベースの表面ケミストリーを持つように修飾されたハードウェアコンポーネントで構築されているため、さらなる試験のために原薬から分離する必要がある特定の化合物の回収率が向上し、再現性が改善します。また、XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD カラムでは、カラムの不動態化/サンプルのコンディショニングが不要になるため、遅滞なくフラクション回収分析を開始できます。

オリゴヌクレオチドを用いてバッチテストされ、選択された BEH C18（130 Å および 300 Å、2.5 µm および 5 µm）粒子

オリゴヌクレオチドを用いてバッチテストされ、選択された BEH C18（130 Å および 300 Å、2.5 µm および 5 µm）粒子

オリゴヌクレオチド用のウォーターズのバッチ認証済み架橋エチルハイブリッド（BEH）テクノロジーにより、さらなるパフォーマンス、再現性、精製のスケールアップが保証されます。高温および高 pH は、オリゴヌクレオチドの分離および精製における二次的相互作用を最小限に抑えるためによく用いられる戦略です。BEH パーティクルテクノロジーは、オリゴヌクレオチド分析に通常必要とされる高 pH、高温、添加剤などの厳しい条件に耐えることができます。

バッチテスト済み、QC 認証済みの XBridge オリゴヌクレオチド OBD 分取カラムにより、再現性および分析法移管にさらなる保証が得られ、標準および新規の化学的に多様な siRNA、ASO、オリゴヌクレオチド試薬の新たな精製ニーズがサポートされます。Oligonucleotide BEH C18 吸着剤の各バッチは、Waters MassPrep オリゴヌクレオチド標準試料で QC テストされ、および酢酸トリエチルアンモニウム IP-RP 分離を用いた厳密な分離能およびピークテーリングの評価により選択されています。 このように慎重に検討された吸着剤が、粒子径 2.5 µm および 5 µm、ポアサイズ 130 Å および 300 Å で利用でき、オリゴヌクレオチドを扱う化学者は、さまざまな合成産物を精製するための一連の汎用性のある選択肢が得られます。

卓越したカラム寿命

卓越したカラム寿命

XBridge および XBridge Premier Oligonucleotide OBD 分取カラムには、Waters BEH（架橋エチルハイブリッド）C18 ハイブリッドシリカ粒子が充塡されており、高 pH・高温条件下でも著しく長いカラム寿命が得られると同時に卓越した分離性能が維持されます。Oligonucleotide BEH C18 カラムは、慎重に手入れすれば、効率や保持力が低下することなく 10,000 回を超えて注入を行えます。

予測可能なローダビリティ

予測可能なローダビリティ

分取精製では、ロードキャパシティーが複数のパラメーターの影響を受けます。カラム効率、ポアサイズ、粒子径、メソッドのパラメーターが重要な役割を果たします。ポアサイズが大きいカラムでは、大きな分析種の質量トランスファーが良好になり、ピーク形状がシャープになります。表面積が減少するため、ロードキャパシティーが低下することがあります。Waters XBridge Oligonucleotide OBD 分取カラムは、さまざまなポアサイズと広範なカラム内径で利用でき、予測可能なスケーリングとロードキャパシティーの向上が得られます。

高純度のフラクションおよび高回収率

高純度のフラクションおよび高回収率

毒性学試験においては、高純度で質の高いオリゴヌクレオチドの精製が、望ましくない不純物に関連する安全性および有効性に関する懸念を最小限に抑えるために重要です。高効率の 2.5 µm XBridge Oligonucleotide OBD 分取カラムにより、早期に溶出する不純物や共溶出する不純物の分離が容易になると同時に、高回収率を損なうことなく、クロマトグラフィープロファイルが維持されます。

「Waters XBridge Oligonucleotide BEH 300Å C18 5 µm OBD カラムにより、早期に溶出する不純物の除去に決定的な改善が見られました。」

— Amy Howie、製品品質およびフルフィルメント担当ディレクター、Oligo Factory, Inc.

— Amy Howie、製品品質およびフルフィルメント担当ディレクター、Oligo Factory, Inc.

Oligo Factory は、後期段階の探索、臨床段階、診断、RUO 用のカスタムオリゴヌクレオチドを専門とする業界トップクラスの CMO であり、すべてのカスタマーに高品質でコスト効率の高いオリゴヌクレオチドを提供するとともに、柔軟で個別化したサービスを提供するという使命を担っています。同社は、ウォーターズコーポレーションと協力して、CRISPR 遺伝子編集の研究使用および臨床使用において重要な sgRNA 分子精製の最適化を行っています。

DNA molecule spiral

ソリューション

MaxPeak HPS 保護による粒子の安定性

MaxPeak HPS 保護による粒子の安定性
XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD（130 Å および 300 Å、5 µm）分取カラム

オリゴヌクレオチドのホスホジエステル基は、標準的なカラム構造に使用される金属に吸着することがあります。低吸着性のカラムハードウェアコンポーネントを使用することにより、キレート化を最小限に抑えることでピーク形状を改善でき、結果としてより確実な保持とより一貫したクロマトグラフィーパラメーターが得られます。内径 10 mm で、長さ 50 mm、100 mm、150 mm で利用可能な XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD（130Å および 300Å、5 µm）分取カラムは、MaxPeak HPS 蒸気を沈着させたコンポーネントを用いて製造されているため、ピーク形状が向上し、回収率が改善します。

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  • Oligonucleotides
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分析法開発のための粒子の安定性と性能

分析法開発のための粒子の安定性と性能
XBridge Oligonucleotide BEH C18 OBD 分取カラム

バッチテスト済みで QC 認証済みの XBridge Oligonucleotide OBD 分取カラムは、さまざまな直径と複数の長さで利用でき、予測可能で柔軟な直接スケールアップができる、ラボスケールの精製のための選択肢になります。以下のサイズで入手可能：

  • XBridge Oligonucleotide BEH C18 300 Å 2.5 µm OBD 分取カラム。このオプションは、大きなオリゴの精製用の特注製品として入手できます。特注製品の見積もりを依頼するには、営業担当にお問い合わせください。

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性能評価用の高純度のオリゴヌクレオチドおよび核酸の配合。

性能評価用の高純度のオリゴヌクレオチドおよび核酸の配合。

性能評価用のオリゴヌクレオチド/核酸標準試料

性能評価用のオリゴヌクレオチド/核酸標準試料
オリゴヌクレオチドおよび核酸の標準試料

ウォーターズは、オリゴヌクレオチド逆相カラムを補完するため、システム適合性試験、分析法開発、トラブルシューティングが容易になる高品質でロット追跡可能な分析用標準試料を提供しています。これには、すべてのウォーターズのオリゴヌクレオチドブランドのカラムの QC 検証に用いる 15 ～ 35 mer の oligodT ラダーを含む Waters MassPREP オリゴヌクレオチド標準試料、LC-MS/MS フラグメンテーションおよび配列分析のベンチマーク用の 20 mer の ssDNA 標準試料、脂質結合高度修飾アンチセンスオリゴヌクレオチド（ASO）、ssDNA、dsDNA などが含まれています。

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分析用カラムを保護し、寿命を延ばします。

分析用カラムを保護し、寿命を延ばします。

カラム寿命を延ばす分取用カラムガード

カラム寿命を延ばす分取用カラムガード
XBridge および XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 分取用カラムガード

Waters XBridge Premier および XBridge Oligonucleotide BEH C18 OBD カラムには、それぞれ同じ高品質の吸着剤が充塡された専用のカラムガードが付属しており、汚染や汚れを防止し、カラムの寿命を延ばし、コストを削減できます。MaxPeak Premier Oligonucleotide OBD 分取用ガードは、MaxPeak Premier OBD カラムと同じ不活性ハードウェアを使用し、優れた化学的適合性と耐久性を提供して、精製における厳しい課題に対応します。

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アプリケーション

オリゴヌクレオチドのホスホジエステル基は、カラム本体およびフリットに存在する金属に吸着することがあります。低吸着性の MaxPeak High Performance Surface カラムハードウェアコンポーネントを使用することにより、キレート化を最小限に抑えることでピーク形状を改善でき、結果としてより確実な保持とより一貫したクロマトグラフィーパラメーターが得られます。XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD 分取カラムは、MaxPeak HPS 蒸気を沈着させたコンポーネントを用いて製造されているため、ピーク形状が向上し、回収率が改善します。

オリゴヌクレオチドのホスホジエステル基は、カラム本体およびフリットに存在する金属に吸着することがあります。低吸着性の MaxPeak High Performance Surface カラムハードウェアコンポーネントを使用することにより、キレート化を最小限に抑えることでピーク形状を改善でき、結果としてより確実な保持とより一貫したクロマトグラフィーパラメーターが得られます。XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD 分取カラムは、MaxPeak HPS 蒸気を沈着させたコンポーネントを用いて製造されているため、ピーク形状が向上し、回収率が改善します。

アプリケーションノート

アプリケーションノート
MaxPeak Premier オリゴヌクレオチドカラムでは、キレート化合物の吸着が低減し、早期に溶出する不純物の検出が向上しているため、毒性学試験がサポートされて容易になります。

ラボスケールのオリゴ精製の課題の 1 つは、ターゲット分子と類似した不純物の分離です。粒子径の小さい粒子では高圧が生じる可能性があるため、ラボスケールの精製では通常あまり使用されません。バッチテスト済みの Waters XBridge Oligonucleotide BEH C18 OBD 2.5 µm 分取カラムにより、複雑な CRISPR sgRNA、siRNA、オリゴ複合体の、低圧での効率的な分離について、新たなレベルの保証が得られます。フォーカスグラジエントモードおよび HFIP を含まない移動相を用いて最適化した精製パラメーターにより、非常に効率的でハイスループット、かつ危険がなくコスト効率の高い精製がサポートされます。

ラボスケールのオリゴ精製の課題の 1 つは、ターゲット分子と類似した不純物の分離です。粒子径の小さい粒子では高圧が生じる可能性があるため、ラボスケールの精製では通常あまり使用されません。バッチテスト済みの Waters XBridge Oligonucleotide BEH C18 OBD 2.5 µm 分取カラムにより、複雑な CRISPR sgRNA、siRNA、オリゴ複合体の、低圧での効率的な分離について、新たなレベルの保証が得られます。フォーカスグラジエントモードおよび HFIP を含まない移動相を用いて最適化した精製パラメーターにより、非常に効率的でハイスループット、かつ危険がなくコスト効率の高い精製がサポートされます。

アプリケーションノート

アプリケーションノート

CRISPR テクノロジーは、遺伝子編集による改変において重要な役割を果たします。このテクノロジーではシングルガイド RNA（sgRNA）を用いるため、sgRNA の純度が治療の正確性および精度の向上のために重要になります。従来の市販の 8 ～ 20 µm HPLC カラムには、ターゲット配列から不純物を分離するのに必要な分離能が不足しているため、医薬品の安全性および正確性のニーズを満たせない場合があります。

新規のバッチテスト済みの XBridge Oligonucleotide BEH C18、300 Å、5 µm カラムにより、sgRNA やこれと関連するアプリケーションなどの高分子核酸の分離効率と保持メカニズムが向上します。小さい粒子径と 300 Å という最適化されたポアサイズを使用して、高精度の CRISPR アプリケーションに必要な新たなレベルのシングルパス純度を実現しています。

CRISPR テクノロジーは、遺伝子編集による改変において重要な役割を果たします。このテクノロジーではシングルガイド RNA（sgRNA）を用いるため、sgRNA の純度が治療の正確性および精度の向上のために重要になります。従来の市販の 8 ～ 20 µm HPLC カラムには、ターゲット配列から不純物を分離するのに必要な分離能が不足しているため、医薬品の安全性および正確性のニーズを満たせない場合があります。

新規のバッチテスト済みの XBridge Oligonucleotide BEH C18、300 Å、5 µm カラムにより、sgRNA やこれと関連するアプリケーションなどの高分子核酸の分離効率と保持メカニズムが向上します。小さい粒子径と 300 Å という最適化されたポアサイズを使用して、高精度の CRISPR アプリケーションに必要な新たなレベルのシングルパス純度を実現しています。

アプリケーションノート

アプリケーションノート

データがすべてを語る

データがすべてを語る
新規の XBridge Oligonucleotide BEH C18 130 Å 2.5 µm OBD 分取カラムを使用した 25 mg の精製におけるフラクションの純度決定。
新規の XBridge Oligonucleotide BEH C18 130 Å 2.5 µm OBD 分取カラムを使用した 25 mg の精製におけるフラクションの純度決定。
（A）MaxPeak Premier（黒線）および標準（灰線）の ACQUITY UPLC BEH C18、130 Å、1.7 µm、2.1 × 50 mm カラムを使用して、ヒドロコルチゾンリン酸エステルについて得られたクロマトグラムの比較。質量ロードは 2 ng でした。10 mM ギ酸アンモニウム（pH 3.0）水系移動相、流速 0.5 mL/分、温度 30℃ で、アセトニトリルグラジエント分離を行いました。ピークは、PDA 検出器を用いて検出し、246 nm のチャンネルを表示しています。（B）MaxPeak Premier カラム（黒色の記号）および標準カラム（灰色の記号）を使用して分離したヒドロコルチゾンリン酸エステルのピーク面積対質量ロードの両対数プロット（質量ロードは 2 ～ 200 ng）。
（A）MaxPeak Premier（黒線）および標準（灰線）の ACQUITY UPLC BEH C18、130 Å、1.7 µm、2.1 × 50 mm カラムを使用して、ヒドロコルチゾンリン酸エステルについて得られたクロマトグラムの比較。質量ロードは 2 ng でした。10 mM ギ酸アンモニウム（pH 3.0）水系移動相、流速 0.5 mL/分、温度 30 ℃ で、アセトニトリルグラジエント分離を行いました。ピークは、PDA 検出器を用いて検出し、246 nm のチャンネルを表示しています。（B）MaxPeak Premier カラム（黒色の記号）および標準カラム（灰色の記号）を使用して分離したヒドロコルチゾンリン酸エステルのピーク面積対質量ロードの両対数プロット（質量ロードは 2 ～ 200 ng）。

リソース

  • ホワイトペーパー：

MaxPeak High Performance Surfaces に基づく低吸着性 HPLC カラム

MaxPeak High Performance Surfaces に基づく低吸着性 HPLC カラム
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  • User Manuals

XBridge および XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 カラム取り扱い説明書

XBridge および XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 カラム取り扱い説明書
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関連情報

MaxPeak Premier OBD 分取カラム
MaxPeak Premier OBD 分取カラムを使用することで、高純度の結果が得られると同時に、分取クロマトグラフィーにつきものの非特異的吸着（NSA）を最小限に抑えられます。

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