Colonne GTxResolve SEC

Quantificazione multi-attributo in piattaforma con SEC-MALS

I virus adeno-associati (AAV) e altri vettori virali sono modalità promettenti per il trattamento delle malattie rare. Per garantire la sicurezza e l’efficacia di questi farmaci, è necessario misurare il contenuto e il livello di impurezze. La cromatografia in size exclusion (SEC) è una tecnica di separazione promettente per la valutazione della quantità dei diversi componenti del campione.

Questa applicazione dimostra la valutazione dei percorsi di degradazione per un virus adeno-associato (AAV) utilizzando una chimica di superficie con una nuova e robusta particella. Le interazioni secondarie inferiori e l’elevata efficienza delle colonne GTxResolve SEC 1000 Å e GTxResolve Premier BEH SEC 450 Å agevolano e chiariscono nuove informazioni sulla progettazione di farmaci e possono pertanto essere utilizzate come strumento adeguato e punto di partenza per i metodi di piattaforma.

Analisi di integrità per acidi nucleici di piccole e grandi dimensioni

Gli studi di integrità che coinvolgono acidi nucleici di grandi dimensioni, come mRNA, possono trarre vantaggio da una rapida analisi in size exclusion. La SEC con una colonna GTxResolve Premier SEC 1000 Å consente di ottenere separazioni ad alta efficienza e di valutare rapidamente l’integrità e la stabilità degli acidi nucleici di dimensioni maggiori. In questa applicazione, la colonna GTxResolve Premier SEC 1000 è associata alla rivelazione MALS, a dimostrazione dell’utilità della SEC a pori larghi nella caratterizzazione degli attributi biofisici.

Eterogeneità delle LNP con tecnologia a pori larghi

Le nanoparticelle lipidiche (LNP) sono vettori fondamentali per il rilascio di mRNA nei vaccini e nelle terapie geniche. Questa applicazione utilizza la colonna Waters GTxResolve 2000 Å SEC con particelle MaxPeak Premier da 3 µm per confrontare l’eterogeneità delle formulazioni delle LNP di due diversi produttori. Il cromatogramma rivela profili di eluizione distinti: il produttore 1 mostra un picco simmetrico stretto, che indica una popolazione di LNP relativamente omogenea. Il produttore 2 presenta un profilo di eluizione più ampio con code e picchi secondari aggiuntivi, suggerendo una formulazione più eterogenea con particelle di dimensioni maggiori. La capacità di profilare tali differenze mette in evidenza la sensibilità e la potenza di risoluzione della colonna, promuovendone l’uso sia nello sviluppo che nel controllo qualità di terapie a base di LNP.

Risolvere plasmidi e vettori

La caratterizzazione delle terapie a base di acidi nucleici richiede strumenti precisi in grado di risolvere specie di DNA strettamente correlate. Ciò è particolarmente importante nelle applicazioni in cui le dimensioni e la topologia influenzano direttamente la potenza, l’efficienza di trasfezione e la conformità normativa. Qui dimostriamo la separazione ad alta risoluzione di due specie di DNA circolare con strutture simili. Queste molecole sono difficili da separare con colonne SEC convenzionali e, in questo esempio, la colonna Waters GTxResolve 2000 Å SEC raggiunge la risoluzione della linea di base, in particolare tra pBR322 e le specie correlate, come evidenziato nell’area cerchiata, e distingue chiaramente i due costrutti di DNA.

Caratterizzazione delle dimensioni di un vettore lentivirale intatto (LVV)

I lentivirus (LV) sono un tipo di retrovirus ampiamente utilizzato come vettore in terapie geniche, terapie cellulari (come CAR-T) e nello sviluppo di vaccini. Ciò che li rende particolarmente preziosi è la loro capacità di integrare in modo stabile il materiale genetico nelle cellule in divisione e in quelle non in divisione, consentendo l’espressione a lungo termine dei geni terapeutici. La caratterizzazione di LV è fondamentale per garantirne la potenza, la purezza e la sicurezza.  Fornisce informazioni chiave sull’integrità, la concentrazione e l’aggregazione delle particelle, fondamentali per lo sviluppo di terapie geniche robuste, scalabili e conformi alle normative.  Qui viene dimostrata la separazione di un campione di LV processato a valle (Rt 12 min) da altre proteine frammentate (Rt 14-15,5) generate durante il processamento utilizzando la colonna Waters GTxResolve 2000Å SEC, MaxPeak 3µm.

Studio di stabilità e integrità del farmaco per vaccini a base di mRNA-LNP

I ricercatori devono monitorare l’integrità e la stabilità di un farmaco a causa delle implicazioni sulla sicurezza e l’efficacia. Riproducibilità, purezza, specificità e intervallo lineare sono alcuni degli attributi di qualità critici presi in considerazione per i vaccini mRNA. La cromatografia in size exclusion è una tecnica particolarmente adatta per la caratterizzazione di aggregati di mRNA e LNP di più grandi dimensioni nei vaccini a base di acido nucleico. È stata esaminata la coerenza del contenuto di nanoparticelle lipidiche (LNP) e la risposta lineare di due formulazioni di LNP (X1 e X2) di due diversi produttori che utilizzavano GTxResolve Premier SEC 1000 Å. Nelle applicazioni di esempio, la risposta lineare viene misurata tracciando l’area del picco in funzione della quantità di LNP iniettata nella colonna GTxResolve Premier SEC 1000.