GTxResolve SEC-Säulen

Plattform-basierte Multi-Attribut-Quantifizierung mit SEC-MALS

Adeno-assoziierte Viren (AAV) und andere virale Vektoren sind vielversprechende Modalitäten für die Behandlung seltener Erkrankungen. Um die Sicherheit und Effektivität dieser Arzneimittel zu gewährleisten, müssen der Medikamentengehalt und der Grad an Verunreinigungen gemessen werden. Die SEC ist eine erfolgversprechende Trenntechnik zur Bestimmung der Menge verschiedener Komponenten einer Probe.

Diese Applikation demonstriert die Bewertung der Abbauwege eines AAV unter Verwendung eines Partikels mit einer neuen und robusten Oberflächenchemie. Die geringeren sekundären Wechselwirkungen und die hohe Effizienz der GTxResolve SEC 1000 Å-Säule und der GTxResolve Premier BEH SEC 450 Å-Säule ermöglichen neue Einblicke in das Wirkstoffdesign und können daher als Ausgangspunkt für Plattformmethoden dienen.

Integritätsanalyse für kleine bis größere Nukleinsäuren

Integritätsstudien mit großen Nukleinsäuren, wie z. B. mRNA, können von einer schnellen Größenausschlussanalyse profitieren. Mithilfe der SEC mit einer GTxResolve Premier SEC 1000 Å-Säule können hocheffiziente Trennungen erreicht und die Integrität und Stabilität größerer Nukleinsäuren schnell beurteilt werden. In dieser Applikation wird die GTxResolve Premier SEC 1000-Säule mit MALS-Detektion kombiniert, was den Nutzen der Wide-Pore-SEC für die Charakterisierung biophysikalischer Attribute demonstriert.

LNP-Heterogenität mit Wide-Pore-Technologie

Lipid-Nanopartikel (LNPs) sind wichtige Träger für den mRNA-Transport in Impfstoffen und Gentherapien. Bei dieser Applikation wird die Waters GTxResolve 2000 Å SEC Säule mit MaxPeak Premier 3 µm Partikeln eingesetzt, um die Heterogenität von LNP-Formulierungen von zwei verschiedenen Herstellern zu vergleichen. Das Chromatogramm zeigt unterschiedliche Elutionsprofile: Hersteller 1 zeigt einen schmalen, symmetrischen Peak, was auf eine relativ homogene LNP-Population hinweist. Bei Hersteller 2 zeigt sich ein breiteres Elutionsprofil mit zusätzlichen Schultern und Sekundärpeaks, was auf eine heterogenere Formulierung mit größeren Partikeln schließen lässt. Die Möglichkeit, Profile solcher Unterschiede zu erstellen, unterstreicht die Empfindlichkeit und das Auflösungsvermögen der Säule. Dies unterstützt ihren Einsatz sowohl bei der Entwicklung als auch bei der Qualitätskontrolle von LNP-basierten Therapeutika.

Auflösung von Plasmiden und Vektoren

Die Charakterisierung von Nukleinsäure-Therapeutiken erfordert präzise Tools, die in der Lage sind, eng verwandte DNA-Spezies aufzulösen. Dies ist besonders wichtig bei Applikationen, bei denen Größe und Topologie die Wirksamkeit, Transfektionseffizienz und Einhaltung regulatorischer Vorschriften direkt beeinflussen. Hier zeigen wir die hochauflösende Trennung von zwei strukturell ähnlichen zirkulären DNA-Spezies. Diese Moleküle sind mit herkömmlichen SEC-Säulen nur schwer zu trennen. In diesem Beispiel erreicht die Waters GTxResolve 2000 Å SEC-Säule eine Basislinienauflösung, insbesondere zwischen pBR322 und seinen verwandten Spezies, wie im eingekreisten Bereich hervorgehoben. So kann klar zwischen den beiden DNA-Konstrukten unterschieden werden.

Größencharakterisierung eines intakten lentiviralen Vektors (LVV)

Lentiviren (LVs) sind eine Art von Retrovirus, die häufig als Vektoren bei Gentherapien, Zelltherapien (wie CAR-T) und der Impfstoffentwicklung eingesetzt werden. Was sie besonders nützlich macht, ist ihre Fähigkeit, Genmaterial stabil in sich teilende und nicht teilende Zellen zu integrieren. Dies ermöglicht die langfristige Expression therapeutischer Gene. Die Charakterisierung des LV ist entscheidend für die Gewährleistung seiner Wirksamkeit, Reinheit und Sicherheit.  Sie liefert wichtige Erkenntnisse über die Integrität, Konzentration und Aggregation von Partikeln, die für die erfolgreiche Entwicklung einer robusten, skalierbaren und regulationskonformen Gentherapie entscheidend sind.  Hier zeigen wir die Trennung einer nachgelagert prozessierten LV-Probe (Rt 12 min) von anderen fragmentierten Proteinen (Rt 14–15,5), die bei der Prozessierung mit einer Waters GTxResolve 2000 Å SEC-Säule, MaxPeak 3 µm, erzeugt wurden.

Medikamentenstabilitäts- und -integritätsstudie für mRNA-LNP-basierte Impfstoffe

Wissenschaftler müssen aufgrund der Auswirkungen auf Sicherheit und Effektivität die Integrität und Stabilität eines Medikaments überwachen. Reproduzierbarkeit, Reinheit, Spezifität und linearer Bereich sind einige der kritischen Qualitätsattribute, die für mRNA-basierte Impfstoffe berücksichtigt werden. Die Größenausschlusschromatographie ist eine gut geeignete Technik zur Charakterisierung größerer mRNA- und LNP-Aggregate in Impfstoffen auf Nukleinsäurebasis. Mithilfe von GTxResolve Premier SEC 1000 Å wurden die Konsistenz des Inhalts von Lipid-Nanopartikeln (LNP) und die lineare Reaktion von zwei LNP-Formulierungen (X1 und X2) von zwei verschiedenen Herstellern untersucht. In den Beispielapplikationen wird die lineare Reaktion durch Auftragen der Peakfläche gegen die Menge an LNP gemessen, die auf die GTxResolve Premier SEC 1000-Säule injiziert wurde.