Los bioconjugados son cada vez más importantes para la terapia de próxima generación, ya que permiten la entrega precisa de potentes cargas útiles a través del diseño molecular dirigido. La optimización de moléculas complejas y heterogéneas requiere tecnologías analíticas robustas para caracterizar por completo los atributos críticos, como los sitios de conjugación, la distribución de la carga útil y la heterogeneidad molecular general.
A medida que las moléculas bioconjugadas pasan del descubrimiento a la comercialización, su diversidad estructural y complejidad presentan importantes desafíos analíticos. La caracterización completa es esencial para garantizar la seguridad, la eficacia y la calidad constante del producto.
Waters proporciona soluciones específicas que ofrecen un conocimiento profundo de la estructura y la calidad de los bioconjugados. Simplifique el análisis de moléculas complejas y acelere la caracterización y la monitorización de los atributos de calidad críticos, independientemente de la estructura del bioconjugado.
Caso práctico: Cómo contribuye Waters al desarrollo de nuevas terapias
Acelere el proceso desde el análisis de muestras hasta la toma de decisiones utilizando waters_connect para biofarmacéuticos, con flujos de trabajo personalizados diseñados para el análisis de bioconjugados con cálculo integrado y automatizado de la ratio de conjugación y la distribución
Logre análisis basados en LC de alta calidad y determine el DAR de ADC altamente hidrofóbicos y conjugados con cisteína utilizando las columnas de cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC) Hi Res Protein-Pak de Waters para separaciones rápidas y eficientes.
Las columnas de fase reversa para bioconjugados y conjugados anticuerpo-fármaco con MaxPeak HPS, como las columnas ACQUITY y XBridge Premier Protein BEH C4, están diseñadas exclusivamente para minimizar las interacciones secundarias entre los ADC y el hardware de la columna, y son adecuadas para el análisis de ADC conjugados con lisina. A diferencia de los ADC conjugados con cisteína, los puentes disulfuro intracatenarios que mantienen los enlaces entre las cadenas pesada y ligera del mAb para los ADC conjugados con lisina están intactos. Por lo tanto, la cromatografía de fase reversa es adecuada para el análisis de ADC conjugados con lisina cuando la química del conector no es lábil a pH ácido. Además, Waters ofrece columnas de fase reversa con tecnología de partículas de núcleo sólido, como BioResolve RP mAb Polyphenyl para análisis de masa intacta y de subunidades para determinar la localización de fármacos enlazados a nivel de dominio.
Elimine la necesidad de crear varias fases móviles de eluyente SEC con diferentes proteínas mediante el uso de un método de plataforma con solución salina tamponada con fosfato (es decir,, PBS) para obtener agregados, monómeros y fragmentos siempre exactos con columnas SEC de Waters. Además, para los bioconjugados que pueden ser hidrofóbicos y crear interacciones secundarias indeseadas, no es necesario añadir eluyente orgánico con las columnas MaxPeak Premier Protein SEC y sus partículas BEH con unión de PEO.
Mida con exactitud los perfiles de variantes de carga de los ADC unidos a cisteína y a lisina con la columna BioResolve SCX mAb y los tampones concentrados de pH BioResolve CX para gradientes salinos o de pH con interacciones secundarias mínimas en la detección óptica. Para obtener información estructural con espectrometría de masas en intercambio iónico, nuestros tampones compatibles con MS, tampones concentrados de pH IonHance CX-MS, hacen realidad la IEX-MS en línea con tampones volátiles de alta pureza adecuados para espectrometría de masas.
Los anticuerpos y oligonucleótidos conjugados (AOC) se utilizan habitualmente en el diagnóstico de proteínas y son un tratamiento prometedor para la terapia celular dirigida. La carga negativa neta de un AOC se expande con cada sitio de conjugación adicional, lo que da como resultado una mayor retención en una resina de intercambio aniónico. La columna GenPak FAX contiene un sorbente de intercambio aniónico débil que muestra una retención controlada y una selectividad única para las muestras de proteínas y oligonucleótidos. El trabajo de aplicación reciente demuestra que AEX se puede acoplar con MALS para generar información de peso molecular absoluto.
La cromatografía de interacción hidrofílica (HILIC) se ha utilizado ampliamente para separar compuestos polares pequeños, pero su aplicación para biomoléculas grandes, distintas de los glicanos liberados, ha sido sorprendentemente limitada. Con las columnas de glicoproteínas de poro ancho de Waters, ahora es posible utilizar HILIC para obtener información previamente inalcanzable sobre proteínas intactas (con o sin glicosilación), fragmentos de proteínas y glicanos liberados complejos.
Los kits de digestiones tripsínicas de proteínas PeptideWorks de Waters para flujos de trabajo manuales o automatizados proporcionan al laboratorio mapas de péptidos reproducibles de alta eficacia en menos de 2,5 horas (4 veces más rápido que el promedio de los métodos caseros). Logre digestiones de 30 minutos con un ratio enzima:péptido de 1:5, una reducción del 78 % en las escisiones omitidas y una reducción del 98 % en los picos de autólisis contaminados. PeptideWorks es ideal para la determinación del sitio de conjugación de fármacos, la caracterización estructural de las proteínas, la identificación de proteínas y la monitorización de la modificación de proteínas, incluidas las modificaciones postraduccionales.
Vuelva a imaginar una forma optimizada, rápida y altamente sensible de perfilar los N-glicanos en ADC con el kit GlycoWorks. Consiga un rendimiento espectrométrico de masas y de fluorescencia sin precedentes para el análisis de N-glicanos liberados, a la vez que se maximiza la productividad con una solución que se puede automatizar en el robot de pipeteo Andrew+ de Waters. Con solo 3 sencillos pasos en tan solo 30 minutos, el kit GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glycan reduce la complicada y larga preparación de muestras.
Simplifique y acelere la digestión de proteínas con los kits de digestión ProteinWorks eXpress. Reactivos predosificados y trazables por lote y protocolos estandarizados para una cuantificación LC-MS exacta, precisa y sensible de proteínas, incluidos los ADC, en plasma y suero. Consiga un rendimiento y una flexibilidad inigualables para la digestión de proteínas reproducible con los kits optimizados para diversos flujos de trabajo, incluido el bioanálisis/metabolismo de fármacos y farmacocinética.
Acelere las mediciones de títulos de anticuerpos con las columnas de afinidad para proteína A BioResolve de Waters con tecnología MaxPeak Premier. Estas columnas de alto rendimiento ayudan a lograr una sensibilidad hasta 7 veces mayor, lo que permite una toma de decisiones más rápida y un mejor control del proceso. Estas columnas también permiten flujos de trabajo analíticos avanzados, incluidos los métodos simplificados Direct Connect 2D ProA‑SEC y ProA‑MS. Optimice procesos y obtenga información detallada y sin precedentes sobre sus anticuerpos.
Agilice la preparación de muestras para análisis cuantitativos de LC-MS con flujos de trabajo verificados que ayuden a minimizar la variabilidad, mejorar la trazabilidad y simplificar la transferencia de métodos.
Optimice la productividad y el éxito de su laboratorio con Waters Global Services para mantener el máximo rendimiento del sistema, minimizar el tiempo de inactividad, abordar los desafíos de las aplicaciones y cumplir con los estrictos requisitos de cumplimiento normativo.
Maximice los recursos y minimice el riesgo con las opciones de pago de Waters Capital, que incluyen la actualización de equipos obsoletos, la obtención de soporte personalizado y la combinación de servicios en un único pago mensual.
Análisis de ADC conjugado con cisteína mediante HIC. La distribución de fármacos se determinó para tres muestras diferentes de ADC conjugado con cisteína con una carga de fármaco creciente.
Resultados de DSC de ADC con ajuste gaussiano obtenidos en el sistema BioAccord para mAb nativo (arriba) y con DAR alto (abajo).
Análisis SEC rápido de trastuzumab emtansina (A) y bevacizumab (B) realizado en una columna XBridge Premier Protein SEC 250 Å 2,5 µm 4,6 x 150 mm. Fase móvil: 1x PBS, pH 7,4, flujo F = 0,7 mL/min, temperatura T = 25 °C, volumen inyectado 1 μL, detección: 280 nm (UV).
Comparación de mapeo de péptidos (cromatogramas UV) de trastuzumab conjugado y sin conjugar
Arriba: Digestión tripsínica de biosimilar de trastuzumab.
Abajo: Trastuzumab emtansina (Kadcyla), digestión tripsínica de conjugado de anticuerpo-fármaco.
En ambas digestiones tripsínicas se utilizaron la tripsina RapiZyme y el kit de digestión de proteínas PeptideWorks, con una inyección de 100 µL (~10 µg) en una columna XSelect Premier Peptide CSH C18 de 2,5 µm y 2,1 x 150 mm. Picos adicionales observados en el cromatograma de Kadcyla (abajo) en comparación con trastuzumab no conjugado (arriba).