Sistema ACQUITY UPLC M-Class con Tecnologia 2D

Ampliate l’impatto della tecnologia 2D completa

L'analisi 2D-LC completa convenzionale utilizza lo scambio ionico (IEX) seguito dalla fase inversa (RP). Qualsiasi approccio IEX si avvale di tamponi contenenti sali che possono causare problemi relativi al fondo di ionizzazione e contaminazioni se entrano in uno spettrometro di massa (MS). Poiché le separazioni IEX si basano esclusivamente sulla carica del peptide, la dimensione IEX si traduce spesso in una scarsa risoluzione cromatografica con peptidi separati in più frazioni, rendendo difficile l'interpretazione dei dati.

L'approccio 2D migliorato del sistema ACQUITY UPLC M-Class con tecnologia 2D utilizza la RP a pH 10 nella prima dimensione, seguita dalla RP a pH 2 nella seconda dimensione, per risultati che superano di gran lunga quelli delle metodologie IEX convenzionali.

Identificazioni sicure per la migliore riproducibilità della categoria

In funzione della risoluzione 2D-LC del sistema ACQUITY UPLC M-Class con tecnologia 2D, il laboratorio può ottenere un numero maggiore di identificazioni sicure, incluse identificazioni riproducibili e incrementali di proteine basate sull'analisi 2D-LC. Ciò si traduce in una migliore identificazione, quantificazione e copertura della sequenza delle proteine. 

Alta risoluzione in entrambe le dimensioni

L'utilizzo dello IEX come prima dimensione di separazione comporta spesso scarsa risoluzione e bleeding tra le frazioni. L'utilizzo di un supporto ad alta risoluzione nel primo passaggio garantisce al laboratorio informazioni migliori nell'ultimo passaggio. Con il supporto della fase inversa a pH 10 seguita da una separazione con particelle di dimensioni inferiori a 2 micron a pH inferiore con il sistema ACQUITY UPLC M-Class con tecnologia 2D, è possibile ottenere separazioni ortogonali utili che forniscono dati di alta qualità.

Una maggiore risoluzione equivale a una migliore identificazione delle proteine

In questa separazione, il digerito triptico di E. coli dimostra il potere dell'analisi 2D-LC completa nella risoluzione di campioni proteomici complessi. Utilizzando il sistema ACQUITY UPLC M-Class in una dimensione, sono stati caricati in colonna 0.5 µg per risolvere e identificare 365 proteine da 2874 peptidi. L'identificazione dei peptidi 7661 e 9415 dalle separazioni in 5 e 10 passaggi rispettivamente è stata ottenuta aggiungendo 2,5 µg al sistema 2D-LC, ottenendo così una maggiore copertura delle proteine con un'elevata affidabilità dei risultati.

Con l'analisi 2D-LC e il sistema ACQUITY UPLC M-Class, i laboratori possono identificare il doppio delle proteine in modo più sicuro, recuperare più peptidi e ottenere una maggiore copertura delle proteine con un'elevata affidabilità dei risultati.