Colonne e Materiali di Consumo per la Purificazione di Oligonucleotidi

Colonne e Materiali di Consumo per la Purificazione di Oligonucleotidi

Scopri in che modo le colonne preparative e i materiali di consumo Waters per oligonucleotidi su scala di laboratorio possono aiutarti a ottenere rapidamente purificazioni con un alto recupero e una produttività elevata grazie allo scale-up diretto. Ogni lotto di sorbente, realizzato con una tolleranza di temperatura e pH leader del settore, è sottoposto a QC e selezionato in base agli standard degli oligonucleotidi Waters per garantire prestazioni e riproducibilità da lotto a lotto.

Scopri in che modo le colonne preparative e i materiali di consumo Waters per oligonucleotidi su scala di laboratorio possono aiutarti a ottenere rapidamente purificazioni con un alto recupero e una produttività elevata grazie allo scale-up diretto. Ogni lotto di sorbente, realizzato con una tolleranza di temperatura e pH leader del settore, è sottoposto a QC e selezionato in base agli standard degli oligonucleotidi Waters per garantire prestazioni e riproducibilità da lotto a lotto.
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Learn how to achieve high performance oligonucleotide preparative chromatography by utilizing XBridge Oligonucleotide OBD Prep Columns and efficient method optimization considerations
I workflow analitici di Waters per la caratterizzazione e il monitoraggio degli oligonucleotidi, noti per la loro solidità e convenienza, garantiscono la comprensione dei processi e la qualità del prodotto

Panoramica

La purificazione di un prodotto oligonucleotidico a lunghezza intera dalle impurezze generate durante la sintesi è essenziale per garantirne la funzionalità, la sicurezza e l’efficacia nelle applicazioni farmaceutiche e diagnostiche. A causa della natura polianionica degli oligonucleotidi, la loro purificazione con selettività e risoluzione elevate è impegnativa. La cromatografia in fase inversa con accoppiamento ionico (IP-RP) è emersa come la tecnica dominante e preferita.

Colonne stabili a pH/temperatura elevati e testate in lotto, con livelli controllati di interazioni secondarie, aiutano a rimuovere rapidamente i colli di bottiglia, dispendiosi in termini di tempo. Le colonne Waters XBridge Oligonucleotide BEH C18 Optimal Bed Density (OBD) si rivelano la scelta ideale per le colonne preparative e offrono prestazioni assicurate, scalabilità costante e purificazione con recupero elevato di vari oligonucleotidi con modifiche chimiche complesse.

  • Le particelle oligonucleotidiche BEH C18 testate per lotto e certificate tramite QC garantiscono un aumento prevedibile dello scale-up e una purificazione coerente su una vasta gamma di diametri della colonna
  • La tecnologia con particelle di silice ibrida BEH C18 offre una stabilità al pH e alla temperatura leader del settore con risoluzione e durata della colonna eccezionali
  • La tecnologia MaxPeak Premier High Performance Surfaces (HPS) (disponibile su colonne con diametro interno pari a 10 mm) offre un’opzione aggiuntiva per ridurre l’adsorbimento non specifico per la massima sensibilità, riproducibilità e produttività
  • Una gamma di standard analitici di alta qualità tracciabili per lotto facilita i test di system suitability, lo sviluppo di metodi e la risoluzione dei problemi
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Impaccatura OBD (Optimum Bed Density)

Impaccatura OBD (Optimum Bed Density)

Nel caso di colonne preparative con proporzioni ridotte, l'impaccamento a sospensione ad alta pressione con piccole particelle spesso non riesce a raggiungere la densità del letto desiderata che si trova in colonne analitiche ben progettate. Una compressione assiale eccessiva all’ingresso può comportare la rottura delle particelle, la canalizzazione e la riduzione della permeabilità del letto. Le colonne OBD progettate con cura offrono vantaggi significativi, tra cui una maggiore durata della colonna, una migliore efficienza, una migliore forma del picco e una contro-pressione più bassa.

Colonne MaxPeak High Performance Surfaces con diametro interno pari a 10 mm

Colonne MaxPeak High Performance Surfaces con diametro interno pari a 10 mm

Gli acidi nucleici, inclusi gli oligonucleotidi, sono polianionici (a carica negativa) e, per questo motivo, adsorbono facilmente gli ossidi sulle superfici nelle colonne in acciaio inossidabile. Le colonne Waters XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD sono realizzate con componenti hardware modificati in modo da avere una superficie con struttura chimica ibrida inerte a base di silice organica/inorganica che riduce notevolmente l’adsorbimento non specifico (NSA) degli acidi nucleici, consentendo così un migliore recupero e una migliore riproducibilità per alcuni composti che devono essere isolati da una sostanza farmaceutica per ulteriori studi. Le colonne XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD eliminano inoltre la necessità di passivazione della colonna/condizionamento del campione, in modo da poter avviare immediatamente le analisi di raccolta delle frazioni. 

Particelle oligonucleotidiche BEH C18 da 130 e 300 Å 2,5 e 5 µm testate per lotto e selezionate

Particelle oligonucleotidiche BEH C18 da 130 e 300 Å 2,5 e 5 µm testate per lotto e selezionate

La tecnologia Bridged Ethyl Hybrid (BEH) di Waters per oligonucleotidi, certificata per lotti, garantisce maggiori prestazioni, riproducibilità e scalabilità per la purificazione. Temperatura e pH elevati rappresentano strategie diffuse per ridurre al minimo le interazioni secondarie nella separazione e purificazione degli oligonucleotidi. La tecnologia con particelle BEH resiste a condizioni difficili, come i livelli elevati di pH, temperatura e additivi normalmente richiesti per analizzare gli oligonucleotidi.

Le colonne preparative XBridge Oligonucleotide OBD, testate per lotto e certificate mediante QC, forniscono un’ulteriore garanzia di riproducibilità e trasferimento del metodo e supportano le emergenti esigenze di purificazione per siRNA, ASO e reagenti oligonucleotidici standard e nuovi, con svariate composizioni chimiche. Ogni lotto di sorbente per colonna Oligonucleotide BEH C18 è stato sottoposto a QC e selezionato utilizzando lo standard Waters MassPrep Oligonucleotide e una valutazione rigorosa della risoluzione e dello scodamento del picco da una separazione IP-RP con trietilammonio acetato. Questi sorbenti attentamente esaminati sono disponibili con dimensioni delle particelle di 2,5 e 5 µm e con dimensioni dei pori di 130 e 300 Å per offrire ai chimici che lavorano sugli oligonucleotidi una gamma di opzioni versatili per purificare svariati prodotti di sintesi.

Durata delle colonne eccezionale

Durata delle colonne eccezionale

Le colonne preparative XBridge e XBridge Premier Oligonucleotide OBD includono particelle di silice ibrida Waters BEH (Ethylene Bridged Hybrid) C18 e hanno una notevole durata in condizioni di pH e temperatura elevati, pur mantenendo prestazioni di separazione eccezionali. Con la dovuta attenzione, è noto che le colonne Oligonucleotide BEH C18 superano le 1000 iniezioni senza perdita di efficienza o ritenzione. 

Capacità di carico prevedibile

Capacità di carico prevedibile

Nelle purificazioni preparative, la capacità di carico è influenzata da più parametri. L’efficienza della colonna, la dimensione dei pori, le dimensioni delle particelle e i parametri del metodo svolgono un ruolo significativo. Le colonne con dimensioni dei pori maggiori permettono un migliore trasferimento di massa e forma del picco più nitide per analiti di dimensioni maggiori. Con la loro superficie ridotta, possono mostrare una capacità di carico inferiore. Le colonne preparative Waters XBridge Oligonucleotide OBD sono disponibili con pori di diverse dimensioni e un’ampia gamma di diametri interni per una scalabilità prevedibile e una migliore capacità di carico.

Frazioni a purezza elevata e rese superiori

Frazioni a purezza elevata e rese superiori

La purificazione per ottenere oligonucleotidi di purezza e qualità elevate è fondamentale per ridurre al minimo le preoccupazioni relative alla sicurezza e all’efficacia legate alle impurezze indesiderate negli studi tossicologici. Le colonne preparative XBridge Oligonucleotide OBD da 2,5 µm ad alta efficienza facilitano l’isolamento delle impurezze a eluizione precoce e di co-eluizione mantenendo il profilo cromatografico senza compromettere l’elevato recupero.

“Le colonne Waters XBridge Oligonucleotide BEH 300 Å C18 5 µm OBD hanno mostrato un miglioramento definitivo nella rimozione delle impurezze a eluizione precoce.”

— Amy Howie, Director of Product Quality and Fulfillment, Oligo Factory, Inc.

— Amy Howie, Director of Product Quality and Fulfillment, Oligo Factory, Inc.

Oligo Factory è un CMO leader nel settore, specializzato in oligonucleotidi personalizzati per le fasi avanzate di discovery e cliniche, diagnostica e RUO con l’obiettivo di fornire oligonucleotidi di alta qualità a costi contenuti, fornendo al contempo un servizio flessibile e personalizzato per ogni cliente. L’azienda collabora con Waters Corporation per ottimizzare la purificazione delle molecole di sgRNA fondamentali per la ricerca e l’uso clinico della modifica genica CRISPR. 

Spirale della molecola di DNA

Soluzioni

Stabilità delle particelle con protezione MaxPeak HPS

Stabilità delle particelle con protezione MaxPeak HPS
Colonne Preparative XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD 130 Å e 300 Å 5 µm

I gruppi fosfodiestere degli oligonucleotidi possono adsorbire i metalli utilizzati nella costruzione di colonne standard. L’utilizzo di componenti hardware della colonna a basso adsorbimento può migliorare la forma del picco riducendo al minimo la chelazione, con conseguente ritenzione più affidabile e parametri cromatografici più coerenti. Le colonne XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD 130 Å e 300 Å 5 µm sono prodotte con componenti MaxPeak HPS depositati per vapore al fine di migliorare la forma del picco e aumentare il recupero e sono disponibili con diametro interno pari a 10 mm e nelle lunghezze di 50, 100 e 150 mm.

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  • Reversed-Phase Analysis
  • Oligonucleotides
  • Purification

Stabilità delle particelle e prestazioni per lo sviluppo di metodi

Stabilità delle particelle e prestazioni per lo sviluppo di metodi
Colonne Preparative XBridge Oligonucleotide BEH C18 OBD

Le colonne XBridge Oligonucleotide OBD, testate per lotto e certificate tramite QC, sono disponibili in un’ampia gamma di diametri e più lunghezze per opzioni di purificazione su scala di laboratorio prevedibili e flessibili per lo scale-up diretto. Le dimensioni includono:

  • Colonne Preparative XBridge Oligonucleotide BEH C18 OBD 300 Å 2.5 µm, sono disponibili opzioni come prodotti personalizzati per la purificazione di oligonucleotidi più grandi. Contatta le Vendite per richiedere un preventivo personalizzato

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Formulazioni di oligonucleotidi e acidi nucleici a purezza elevata per il benchmarking delle prestazioni.

Formulazioni di oligonucleotidi e acidi nucleici a purezza elevata per il benchmarking delle prestazioni.

Standard per oligonucleotidi/acidi nucleici per il benchmarking delle prestazioni

Standard per oligonucleotidi/acidi nucleici per il benchmarking delle prestazioni
Standard per Oligonucleotidi e Acidi Nucleici

A complemento delle colonne oligonucleotidiche in fase inversa, Waters fornisce una gamma di standard analitici di alta qualità, tracciabili per lotto, per facilitare i test di system suitability, lo sviluppo dei metodi e la risoluzione dei problemi. Questi includono il nostro standard per oligonucleotidi MassPREP contenente una scala oligodT da 15 a 35 mer per il QC di tutte le colonne oligonucleotidiche a marchio Waters, uno standard ssDNA a 20 mer per il benchmarking della frammentazione e l’analisi delle sequenze LC-MS/MS, un oligonucleotide antisenso (ASO) fortemente modificato e coniugato con lipidi, scale ssDNA e dsDNA e altro ancora.

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Proteggi e prolunga la durata della colonna analitica.

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Pre-colonna preparativa per una maggiore durata della colonna

Pre-colonna preparativa per una maggiore durata della colonna
Pre-colonna Preparativa XBridge Oligonucleotide BEH C18

Le colonne XBridge Oligonucleotide BEH C18 OBD sono disponibili con pre-colonne. Le cartucce delle colonne sono impaccate con lo stesso sorbente e possono essere utilizzate per prevenire la contaminazione e l’intasamento delle colonne preparative, con conseguente maggiore durata. Il posizionamento del gruppo pre-colonna a monte della colonna preparativa consente di prolungare la durata della colonna e di ridurre i costi di purificazione.

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Applicazioni

I gruppi fosfodiestere degli oligonucleotidi possono adsorbire i metalli presenti nel corpo della colonna e nelle fritte. L’hardware delle colonne MaxPeak High Performance Surface, grazie al suo basso adsorbimento, può migliorare la forma del picco riducendo al minimo la chelazione, con conseguente ritenzione più affidabile e parametri cromatografici più coerenti. Le colonne XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD sono prodotte con componenti MaxPeak HPS depositati per vapore al fine di migliorare la forma del picco e migliorare il recupero.

I gruppi fosfodiestere degli oligonucleotidi possono adsorbire i metalli presenti nel corpo della colonna e nelle fritte. L’hardware delle colonne MaxPeak High Performance Surface, grazie al suo basso adsorbimento, può migliorare la forma del picco riducendo al minimo la chelazione, con conseguente ritenzione più affidabile e parametri cromatografici più coerenti. Le colonne XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 OBD sono prodotte con componenti MaxPeak HPS depositati per vapore al fine di migliorare la forma del picco e migliorare il recupero.

Note Applicative

Note Applicative
Le colonne MaxPeak Premier Oligonucleotide riducono l’adsorbimento dei composti chelanti e migliorano la rivelazione delle impurezze a eluizione precoce per supportare e facilitare potenziali studi tossicologici.

Una sfida con la purificazione degli oligonucleotidi su scala di laboratorio è l’isolamento delle impurezze che possono essere simili alle molecole target. Le particelle di piccole dimensioni di solito non sono comuni nelle purificazioni su scala di laboratorio a causa dell’alta pressione che possono generare. Le colonne Waters XBridge Oligonucleotide BEH C18 OBD da 2,5 µm testate per lotto offrono un nuovo livello di affidabilità per l’isolamento efficiente a bassa pressione di sgRNA, siRNA e oligoconiugati CRISPR complessi. I parametri di purificazione ottimizzati con la modalità a gradiente focalizzato e la fase mobile priva di HFIP supportano una purificazione altamente efficiente, ad alta produttività, priva di rischi ed economicamente vantaggiosa.

Una sfida con la purificazione degli oligonucleotidi su scala di laboratorio è l’isolamento delle impurezze che possono essere simili alle molecole target. Le particelle di piccole dimensioni di solito non sono comuni nelle purificazioni su scala di laboratorio a causa dell’alta pressione che possono generare. Le colonne Waters XBridge Oligonucleotide BEH C18 OBD da 2,5 µm testate per lotto offrono un nuovo livello di affidabilità per l’isolamento efficiente a bassa pressione di sgRNA, siRNA e oligoconiugati CRISPR complessi. I parametri di purificazione ottimizzati con la modalità a gradiente focalizzato e la fase mobile priva di HFIP supportano una purificazione altamente efficiente, ad alta produttività, priva di rischi ed economicamente vantaggiosa.

Note Applicative

Note Applicative

La tecnologia CRISPR svolge un ruolo fondamentale nella modifica genica. La tecnologia utilizza l’RNA a filamento singolo (sgRNA): da qui l’importanza della purezza dello sgRNA per accuratezza e precisione terapeutiche migliori. Le tradizionali colonne HPLC da 8 a 20 µm in commercio potrebbero non soddisfare i requisiti di sicurezza e accuratezza farmacologiche a causa della mancanza del potere di risoluzione necessario per isolare le impurezze dalle sequenze target. 

La nuova colonna XBridge Oligonucleotide BEH C18, 300 Å, 5 µm, testata per lotto, migliora l’efficienza di separazione e il meccanismo di ritenzione per acidi nucleici di grandi dimensioni come l’sgRNA e le applicazioni correlate. Le dimensioni più piccole delle particelle e le dimensioni ottimizzate dei pori da 300 Å sono applicate per raggiungere nuovi livelli di purezza in un solo passaggio, necessari per applicazioni CRISPR ad alta precisione.

La tecnologia CRISPR svolge un ruolo fondamentale nella modifica genica. La tecnologia utilizza l’RNA a filamento singolo (sgRNA): da qui l’importanza della purezza dello sgRNA per accuratezza e precisione terapeutiche migliori. Le tradizionali colonne HPLC da 8 a 20 µm in commercio potrebbero non soddisfare i requisiti di sicurezza e accuratezza farmacologiche a causa della mancanza del potere di risoluzione necessario per isolare le impurezze dalle sequenze target. 

La nuova colonna XBridge Oligonucleotide BEH C18, 300 Å, 5 µm, testata per lotto, migliora l’efficienza di separazione e il meccanismo di ritenzione per acidi nucleici di grandi dimensioni come l’sgRNA e le applicazioni correlate. Le dimensioni più piccole delle particelle e le dimensioni ottimizzate dei pori da 300 Å sono applicate per raggiungere nuovi livelli di purezza in un solo passaggio, necessari per applicazioni CRISPR ad alta precisione.

Note Applicative

Note Applicative

I dati parlano da soli

I dati parlano da soli
Determinazioni della purezza delle frazioni per un’analisi di purificazione di 25 mg utilizzando una nuova colonna preparativa XBridge Oligonucleotide BEH C18 130 Å 2,5 µm OBD.
Determinazioni della purezza delle frazioni per un’analisi di purificazione di 25 mg utilizzando una nuova colonna preparativa XBridge Oligonucleotide BEH C18 130 Å 2,5 µm OBD.
(A) Confronto dei cromatogrammi ottenuti per l’idrocortisone fosfato utilizzando le colonne MaxPeak Premier (traccia in nero) e lo standard (traccia in grigio) ACQUITY UPLC BEH C18, 130 Å, 1,7 µm, 2,1 x 50 mm. Il carico di massa era pari a 2 ng. Le separazioni con gradiente di acetonitrile sono state eseguite con una fase mobile acquosa di formiato di ammonio 10 mM (pH 3,0), una velocità di flusso di 0,5 mL/min e una temperatura di 30°C. I picchi sono stati rivelati utilizzando un rivelatore PDA, con il canale a 246 nm visualizzato. (B) Grafico log-log dell’area del picco rispetto al carico di massa per l’idrocortisone fosfato separato utilizzando le colonne MaxPeak Premier (simboli in nero) e standard (simboli in grigio), con un carico di massa da 2 a 200 ng.
(A) Confronto dei cromatogrammi ottenuti per l’idrocortisone fosfato utilizzando le colonne MaxPeak Premier (traccia in nero) e lo standard (traccia in grigio) ACQUITY UPLC BEH C18, 130 Å, 1,7 µm, 2,1 x 50 mm. Il carico di massa era pari a 2 ng. Le separazioni con gradiente di acetonitrile sono state eseguite con una fase mobile acquosa di formiato di ammonio 10 mM (pH 3,0), una velocità di flusso di 0,5 mL/min e una temperatura di 30 °C. I picchi sono stati rivelati utilizzando un rivelatore PDA, con il canale a 246 nm visualizzato. (B) Grafico log-log dell’area del picco rispetto al carico di massa per l’idrocortisone fosfato separato utilizzando le colonne MaxPeak Premier (simboli in nero) e standard (simboli in grigio), con un carico di massa da 2 a 200 ng.

Risorse

  • White paper

Colonne HPLC a Basso Adsorbimento Basate su MaxPeak High Performance Surface

Colonne HPLC a Basso Adsorbimento Basate su MaxPeak High Performance Surface
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  • User Manuals

Colonne XBridge e XBridge Premier BEH C18 per Oligonucleotidi Manuale d’Uso e Manutenzione

Colonne XBridge e XBridge Premier BEH C18 per Oligonucleotidi Manuale d’Uso e Manutenzione
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