寡核苷酸纯化色谱柱与消耗品

沃特世提供实验室规模的制备级寡核苷酸分析专用柱与消耗品，帮助快速直接地完成方法放大，实现高回收率、高通量的纯化。每批吸附剂都使用沃特世寡核苷酸标准品进行了QC测试和筛选，具有业内出色的pH和温度耐受性，能够确保批次间性能和重现性。

沃特世提供实验室规模的制备级寡核苷酸分析专用柱与消耗品，帮助快速直接地完成方法放大，实现高回收率、高通量的纯化。每批吸附剂都使用沃特世寡核苷酸标准品进行了QC测试和筛选，具有业内出色的pH和温度耐受性，能够确保批次间性能和重现性。

Learn how to achieve high performance oligonucleotide preparative chromatography by utilizing XBridge Oligonucleotide OBD Prep Columns and efficient method optimization considerations

概述

纯化全长寡核苷酸产物以去除合成过程中产生的杂质，对于确保其在制药和诊断应用中的功能、安全性和有效性至关重要。由于寡核苷酸具有聚阴离子性质，导致纯化过程难以实现高选择性和高分离度。离子对反相色谱(IP-RP)已成为优先用于寡核苷酸分析的主流技术。

在高pH值/高温条件下保持稳定且经过批次测试、次级相互作用水平控制得当的色谱柱有助于快速突破耗时的分析瓶颈。Waters XBridge BEH C₁₈最佳柱床密度(OBD)寡核苷酸分析专用柱是优选的制备型色谱柱，性能有保障，可提供一致的可扩展性，能够以高回收率纯化各种具有复杂化学修饰的寡核苷酸。

BEH C₁₈寡核苷酸分析专用填料颗粒经过批次检测和QC认证，能够在各种直径范围的色谱柱中实现可预测的方法放大，完成一致的纯化操作
BEH C₁₈杂化硅胶颗粒技术可提供业内出色的pH和温度稳定性，分离度突出，色谱柱使用寿命也更长
MaxPeak Premier高性能表面(HPS)技术（已推出内径10 mm的色谱柱）为减少非特异性吸附提供了一种额外选择，从而尽可能提高灵敏度、重现性和生产率
一系列具有批次可溯源性的高质量分析标准品，有助于系统适应性测试、方法开发和故障诊断排除

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网络研讨会：RNA纯化的艺术：提高长修饰寡核苷酸可扩展性与产量的方法考量

从分析级到制备级放大合成寡核苷酸纯化的方法

本次网络研讨会将聚焦纯化与分析中的关键挑战，重点探讨以下内容：

提升复杂RNA的可扩展性与回收率
从分析级到制备级的IP-RP方法优化考量
多平台半制备级纯化的灵活实施策略

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最佳柱床密度填充

最佳柱床密度填充

由于制备型色谱柱的长径比(aspect ratio)较小，采用高压浆料填装法填充小颗粒时，往往无法达到设计良好的分析型色谱柱中所期望的填料密度。进样口处轴向压力过大会导致颗粒破裂、通道效应和柱床渗透性降低。精心设计的OBD色谱柱具有显著优势，包括色谱柱使用寿命更长、柱效更高、峰形更好且柱压有所降低。

内径10 mm的MaxPeak高性能表面色谱柱

内径10 mm的MaxPeak高性能表面色谱柱

核酸（包括寡核苷酸）是聚阴离子分析物（带负电荷），因此容易吸附到不锈钢色谱柱中的金属氧化物表面。Waters XBridge Premier BEH C₁₈ OBD寡核苷酸分析专用柱采用经过改良的硬件组件，以及惰性的有机/无机杂化硅胶基质表面填料，可大幅减少核酸的非特异性吸附(NSA)，对于某些需要从原料药中分离出来以供进一步研究的化合物，有助于提高回收率和重现性。XBridge Premier BEH C₁₈ OBD寡核苷酸分析专用柱还省去了色谱柱钝化/样品活化步骤，因此可以立即开始运行馏分收集工作。

经过批次检测和筛选的BEH C₁₈ 130 Å和300 Å 2.5 µm和5 µm颗粒，用于寡核苷酸分析

经过批次检测和筛选的BEH C₁₈ 130 Å和300 Å 2.5 µm和5 µm颗粒，用于寡核苷酸分析

沃特世的每一批亚乙基桥杂化(BEH)技术色谱柱均经过认证，可在寡核苷酸的纯化分析中展现出众的性能、重现性，并支持规模放大。在寡核苷酸的分离和纯化中，高温和高pH值是尽可能减少次级相互作用的常用策略。BEH颗粒技术可耐受寡核苷酸分析通常所需的严苛条件，例如高pH值、高温和高添加剂含量。

XBridge OBD制备型寡核苷酸分析专用柱经过批次检测和QC认证，为重现性、方法转移提供了额外保障，并支持标准和新型化学物质如siRNA、ASO和寡核苷酸药物的新兴纯化需求。每批BEH C₁₈寡核苷酸吸附剂都使用Waters MassPrep寡核苷酸标准品进行了QC测试和筛选，并通过乙酸三乙铵IP -RP分离进行了严格的分离度和峰拖尾评估。这些吸附剂经过仔细考察，提供2.5 µm和5 µm粒径以及130 Å和300 Å孔径规格，为寡核苷酸的分析人员提供了多种通用选择，使他们得以纯化各种合成产品。

超长的色谱柱使用寿命

超长的色谱柱使用寿命

XBridge和XBridge Premier OBD制备型寡核苷酸分析专用柱填充Waters BEH（亚乙基桥杂化）C₁₈杂化硅胶颗粒，即使在高pH和高温条件下也具有很长的色谱柱使用寿命，同时保持出色的分离性能。只要仔细保养，BEH C₁₈寡核苷酸分析专用柱可执行超过1,0000次进样，且柱效或保留性不受影响。

载样量可预测

载样量可预测

在制备型纯化中，载样量受到多个参数影响，柱效、孔径、粒径和方法参数都发挥了重要作用。色谱柱孔径越大，传质越顺畅，大分子分析物的峰形越清晰。但由于表面积减小，载样量可能会降低。Waters XBridge OBD制备型寡核苷酸分析专用柱有不同的孔径和内径供您选择，扩展性可预测，并且能够提供更高的载样量。

获得高纯度馏分和更高产率

获得高纯度馏分和更高产率

在毒理学研究中，高纯度、高品质的寡核苷酸纯化对于尽可能避免不良杂质带来的安全性和有效性问题至关重要。2.5 µm XBridge OBD制备型寡核苷酸分析专用柱具有高柱效，有助于分离早期洗脱和共洗脱杂质，同时能够保持色谱特征，并且无损高回收率。

“Waters XBridge BEH 300 Å C₁₈5 µm OBD寡核苷酸分析专用柱对先洗脱杂质的去除效果显著。”

— Amy Howie，Oligo Factory, Inc.产品质量与订单履行总监

Oligo Factory是一家在业内排名前列的CMO，专注于为后期研发、临床阶段、诊断和RUO提供定制的寡核苷酸。这家公司以提供高质量、经济有效的寡核苷酸为使命，同时为每一位客户提供灵活的个性化服务。他们正在与沃特世公司合作，以优化在CRISPR基因编辑的研究和临床应用中至关重要的sgRNA分子的纯化方法。

解决方案

BEH C18反相制备型寡核苷酸分析专用柱提供2.5 μm和5 μm粒径规格，色谱柱尺寸多样，内径可达50 mm。

在MaxPeak HPS的保护下提升颗粒稳定性

在MaxPeak HPS的保护下提升颗粒稳定性

XBridge Premier BEH C18 OBD 130 Å和300 Å 5 µm制备型寡核苷酸分析专用柱

寡核苷酸中的磷酸二酯基团会吸附到标准色谱柱所用的金属材料上。使用低吸附色谱柱硬件组件可尽量减少螯合现象，获得更可靠的保留性能和更加一致的色谱参数，从而改善峰形。XBridge Premier BEH C₁₈ OBD 130 Å和300 Å 5 µm制备型寡核苷酸分析专用柱的制造采用了MaxPeak HPS气相沉积组件，可改善峰形并提高回收率；这款色谱柱提供10 mm内径，50 mm、100 mm和150 mm柱长规格。

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颗粒稳定性和性能满足方法开发的要求

颗粒稳定性和性能满足方法开发的要求

XBridge BEH C18 OBD制备型寡核苷酸分析专用柱

XBridge OBD制备型寡核苷酸分析专用柱经过批次检测和QC认证，提供多种内径和柱长规格，能够灵活进行可预测的直接方法放大。具体规格如下：

XBridge 130 Å和300 Å 5 µm OBD制备型寡核苷酸分析专用柱，HPLC方法开发的主力产品，提供不锈钢和MaxPeak硬件的标准孔径和大孔径选项，经过寡核苷酸批次测试和QC认证

XBridge 130 Å 2.5 µm OBD制备型寡核苷酸分析专用柱，提供优异的样品分离度和更长的色谱柱使用寿命

XBridge BEH C18 300 Å 2.5 µm OBD制备型寡核苷酸分析专用柱，支持定制化产品方案，适用于大分子寡核苷酸的纯化需求。请联系销售人员获取自定义报价

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使用高纯度寡核苷酸和核酸制剂进行性能基准测试。

沃特世针对SEC、IP-RP、AEX和HILIC应用提供的寡核苷酸和核酸标准品。

用于性能基准测试的寡核苷酸/核酸标准品

用于性能基准测试的寡核苷酸/核酸标准品

寡核苷酸和核酸标准品

沃特世提供一系列具有批次可溯源性的高质量分析标准品，与寡核苷酸反相色谱柱相辅相成，助力系统适应性测试、方法开发和故障诊断排除。包括：MassPREP寡核苷酸标准品（含15-35 mer oligodT ladder）— 用于QC验证所有沃特世寡核苷酸品牌色谱柱；20 mer ssDNA标准品 — 用于LC-MS/MS碎片分析和序列分析的性能基准测试；脂质偶联重链修饰的反义寡核苷酸(ASO)；ssDNA；和dsDNA ladder等。

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保护分析柱并延长其使用寿命。

制备型色谱柱的保护柱有助于延长色谱柱使用寿命

制备型色谱柱的保护柱有助于延长色谱柱使用寿命

XBridge和XBridge Premier BEH C18制备型寡核苷酸分析专用柱的保护柱

Waters XBridge Premier和XBridge BEH C₁₈ OBD寡核苷酸分析专用柱可配备专用的色谱柱保护柱，分别填充有相同的高质量吸附剂，以防止污染和污垢，延长色谱柱使用寿命并降低成本。MaxPeak Premier OBD制备级寡核苷酸分析专用柱的保护柱采用与MaxPeak Premier OBD色谱柱相同的惰性硬件，具有出色的化学相容性和耐用性，可满足严苛的纯化挑战。

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应用

高回收率寡核苷酸纯化
寡核苷酸纯化方法的放大
CRISPR sgRNA纯化

寡核苷酸中的磷酸二酯基团会吸附到色谱柱柱体和筛板的金属材料上。使用低吸附的MaxPeak高性能表面色谱柱硬件组件可尽量减少螯合现象，获得更可靠的保留性能和更加一致的色谱参数，从而改善峰形。XBridge Premier BEH C₁₈ OBD制备型寡核苷酸分析专用柱的制造采用了MaxPeak HPS气相沉积组件，可改善峰形并提高回收率。

寡核苷酸中的磷酸二酯基团会吸附到色谱柱柱体和筛板的金属材料上。使用低吸附的MaxPeak高性能表面色谱柱硬件组件可尽量减少螯合现象，获得更可靠的保留性能和更加一致的色谱参数，从而改善峰形。XBridge Premier BEH C₁₈ OBD制备型寡核苷酸分析专用柱的制造采用了MaxPeak HPS气相沉积组件，可改善峰形并提高回收率。

应用纪要

MaxPeak Premier寡核苷酸分析专用柱可减少螯合物的吸附，并且对先洗脱的杂质有更好的检测效果，可为潜在的毒理学研究提供支持与助力。

在实验室规模的寡核苷酸纯化中，分离与目标分子相似的杂质是一项挑战。粒径较小的颗粒由于会产生高压，因此通常不用于实验室规模纯化。Waters XBridge BEH C₁₈ OBD 2.5 µm制备型寡核苷酸分析专用柱经过批次检测，能够在低压条件下高效分离复杂的CRISPR sgRNA、siRNA和寡核苷酸偶联物，将性能保障提升至全新水平。纯化参数经过优化，使用聚焦梯度模式以及不含HFIP的流动相，有助于实现高效、高通量、无风险且经济有效的纯化过程。

在实验室规模的寡核苷酸纯化中，分离与目标分子相似的杂质是一项挑战。粒径较小的颗粒由于会产生高压，因此通常不用于实验室规模纯化。Waters XBridge BEH C₁₈ OBD 2.5 µm制备型寡核苷酸分析专用柱经过批次检测，能够在低压条件下高效分离复杂的CRISPR sgRNA、siRNA和寡核苷酸偶联物，将性能保障提升至全新水平。纯化参数经过优化，使用聚焦梯度模式以及不含HFIP的流动相，有助于实现高效、高通量、无风险且经济有效的纯化过程。

应用纪要

CRISPR技术在基因编辑修饰中发挥着关键作用。这项技术利用了单向导RNA (sgRNA)，因此，sgRNA的纯度对提高治疗的准确性和精确性具有重要意义。市面上传统的8 µm~20 µm HPLC色谱柱由于分离能力不足以从目标序列中分离出杂质，可能无法满足对药物安全性和准确性的要求。

全新的XBridge BEH C₁₈, 300 Å, 5 µm寡核苷酸分析专用柱经过批次检测，可改善sgRNA等大分子核酸及相关应用的分离效率和保留机制。这款色谱柱采用更小的粒径和300 Å的优化孔径，可以在一次操作中达到更高的纯度，从而满足高精度CRISPR应用的要求。

CRISPR技术在基因编辑修饰中发挥着关键作用。这项技术利用了单向导RNA (sgRNA)，因此，sgRNA的纯度对提高治疗的准确性和精确性具有重要意义。市面上传统的8 µm~20 µm HPLC色谱柱由于分离能力不足以从目标序列中分离出杂质，可能无法满足对药物安全性和准确性的要求。

全新的XBridge BEH C₁₈, 300 Å, 5 µm寡核苷酸分析专用柱经过批次检测，可改善sgRNA等大分子核酸及相关应用的分离效率和保留机制。这款色谱柱采用更小的粒径和300 Å的优化孔径，可以在一次操作中达到更高的纯度，从而满足高精度CRISPR应用的要求。

应用纪要

使用经过认证的高柱效BEH 300 Å C18 5 µm制备型寡核苷酸专用吸附剂优化IP-RP CRISPR sgRNA的纯化过程

数据说明一切

使用新型XBridge BEH C18 130 Å 2.5 µm OBD制备型寡核苷酸分析专用柱纯化25 mg样品得到的馏分纯度测定结果

使用新型XBridge BEH C₁₈ 130 Å 2.5 µm OBD制备型寡核苷酸分析专用柱纯化25 mg样品得到的馏分纯度测定结果

(A)使用MaxPeak Premier（黑色迹线）和标准（灰色迹线）ACQUITY UPLC BEH C18, 130 Å, 1.7 µm, 2.1 x 50 mm色谱柱得到的氢化可的松磷酸酯色谱图比较。载样量为2 ng。运行乙腈和10 mM甲酸铵(pH 3.0)水性流动相组成的梯度进行分离，流速0.5 mL/min，温度30℃。使用PDA检测器检测峰，图中所示为246 nm通道的谱图。(B)使用MaxPeak Premier色谱柱（黑色标志）和标准色谱柱（灰色标志）分离氢化可的松磷酸酯得到的峰面积相对于载样量绘制的双对数坐标图，载样量为2-200 ng。

(A)使用MaxPeak Premier（黑色迹线）和标准（灰色迹线）ACQUITY UPLC BEH C₁₈, 130 Å, 1.7 µm, 2.1 x 50 mm色谱柱得到的氢化可的松磷酸酯色谱图比较。载样量为2 ng。运行乙腈和10 mM甲酸铵(pH 3.0)水性流动相组成的梯度进行分离，流速0.5 mL/min，温度30 ℃。使用PDA检测器检测峰，图中所示为246 nm通道的谱图。(B)使用MaxPeak Premier色谱柱（黑色标志）和标准色谱柱（灰色标志）分离氢化可的松磷酸酯得到的峰面积相对于载样量绘制的双对数坐标图，载样量为2–200 ng。

资源

基于MaxPeak高性能表面的低吸附HPLC色谱柱

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XBridge和XBridge Premier BEH C18寡核苷酸分析专用柱维护和使用手册

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概述

从分析级到制备级放大合成寡核苷酸纯化的方法

最佳柱床密度填充

内径10 mm的MaxPeak高性能表面色谱柱

经过批次检测和筛选的BEH C₁₈ 130 Å和300 Å 2.5 µm和5 µm颗粒，用于寡核苷酸分析

超长的色谱柱使用寿命

载样量可预测

获得高纯度馏分和更高产率

— Amy Howie，Oligo Factory, Inc.产品质量与订单履行总监

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在MaxPeak HPS的保护下提升颗粒稳定性