适用于基因治疗药物的AEX色谱柱和标准品

适用于基因治疗药物的AEX色谱柱和标准品

为各种基因治疗药物开发基于电荷的方法。沃特世AEX色谱柱具有通用的保留性和选择性，适合专注于合成寡核苷酸、CRISPR基因编辑、mRNA、质粒DNA和病毒载体分析的药物开发人员使用。

为各种基因治疗药物开发基于电荷的方法。沃特世AEX色谱柱具有通用的保留性和选择性，适合专注于合成寡核苷酸、CRISPR基因编辑、mRNA、质粒DNA和病毒载体分析的药物开发人员使用。
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概述

AEX是分离基因治疗药物的基础技术，包括反义寡核苷酸、siRNA、CRISPR单向导RNA (sgRNA)、核糖核蛋白复合物、mRNA、DNA质粒和病毒衣壳。阴离子交换机制基于带负电荷的分析物和带正电荷的固定相之间的静电相互作用。生物分子的负电性越强，在色谱柱树脂上的吸附越紧密。随着流动相的离子强度或pH值变化，分析物基于电荷密度进行分离和洗脱。

为工作流程选择合适的沃特世AEX色谱柱和标准品，确保获得理想的分析条件。

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弱阴离子交换色谱柱助力改善分离效果

弱阴离子交换色谱柱助力改善分离效果

沃特世的Gen-Pak FAX (4.6 x 100 mm)色谱柱能够在核酸的阴离子交换HPLC分析中提供更高的分离度。Gen-Pak FAX色谱柱包含基于DEAE官能化无孔树脂的弱阴离子交换剂，填充2.5 µm颗粒，非常适合分析级和微量制备级应用。

  • 弱阴离子交换无孔聚合物色谱柱
  • 使合成寡核苷酸和核酸实现高分离度分离
  • 特有的DEAE选择性和低保留性，满足特定应用的需求

强阴离子交换色谱柱，在更短的时间内获得出色的分离度

强阴离子交换色谱柱，在更短的时间内获得出色的分离度

沃特世的Protein-Pak Hi Res Q (4.6 x 100 mm)离子交换(IEX)色谱柱可用于重组蛋白、单克隆抗体、以及其他生物化合物的表征分析。这些色谱颗粒的无孔、高载量结合能力，使其与许多传统多孔性IEX填料颗粒相比，能让带电物质在更短时间内获得出色的分离度。

  • 强阴离子交换无孔聚合物填充柱
  • 季铵键合官能团，具有高载量结合能力
  • 兼容多种生物分子

网络研讨会：有关核酸阴离子交换和体积排阻分析方法的新见解

为mRNA和AAV分离开发新的AEX和SEC方法

mRNA疫苗的成功证明了核酸药物的实力。因此，需要使用更多的表征分析工具来提供有关稳定性、异质性、药物设计和结构-功能关系的更多信息。AEX和体积排阻色谱(SEC)技术都非常适合实现核酸及其载体的高分离度分离。本网络研讨会深入探讨了一种更耐用的平台方法，该方法适用于多种药物成分和样品类型（包括AAV和mRNA）。

为mRNA和AAV分离开发新的AEX和SEC方法

mRNA疫苗的成功证明了核酸药物的实力。因此，需要使用更多的表征分析工具来提供有关稳定性、异质性、药物设计和结构-功能关系的更多信息。AEX和体积排阻色谱(SEC)技术都非常适合实现核酸及其载体的高分离度分离。本网络研讨会深入探讨了一种更耐用的平台方法，该方法适用于多种药物成分和样品类型（包括AAV和mRNA）。

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解决方案

WAX的用与不用

WAX的用与不用
Gen-Pak FAX色谱柱

在非变性条件下，寡核苷酸和长链核酸包含携带负电荷的聚阴离子磷酸盐骨架，这一官能团使核酸成为适用于AEX的理想候选物。沃特世Gen-Pak FAX色谱柱是一种无孔的2.5 µm弱阴离子交换树脂，专为分析合成寡核苷酸到mRNA的各种核酸而设计。

  • Synthetic Oligonucleotide Separations
  • Oligonucleotide Anion Exchange Separations
  • Empty/Full Viral Capsid Analysis

SAX到MAX

SAX到MAX
Protein-Pak Hi Res Q色谱柱

Protein-Pak Hi Res Q色谱柱含有带季铵官能团的无孔聚合物树脂，它在强阴离子/阳离子交换(SAX)应用方面具有丰富而广泛的用途，包括mRNA的完整性分析、CRISPR单导向RNA (sgRNA)和核糖核蛋白复合物的形成、质粒DNA的亚型定量以及病毒载体基因疗法的空/满包封分析。

  • Oligonucleotide Anion Exchange Separations
  • Intact mRNA Analysis
  • Evaluating CRISPR Guide RNA and Ribonucleoprotein Complex Formation
  • Empty/Full Viral Capsid Analysis

用于AEX基准测试的寡核苷酸和核酸标准品

用于AEX基准测试的寡核苷酸和核酸标准品
寡核苷酸与核酸标准品

AEX方法是用于基因治疗药物表征和质量确认的强大工具。拥有与分析物化学性质相似的高品质参比物质有助于加快方法开发速度，并为未来的分析提供认证参比物质。

  • Lipid conjugated ASO
  • siRNA oligonucleotides
  • Single-Guide RNA (sgRNA)
  • DNA Ladder
  • Empty/Full Viral Capsid Analysis

应用

Gen Pak FAX弱阴离子交换树脂在许多应用示例中均表现出优异的分离能力、更高的回收率，并且对蛋白质、寡核苷酸和核酸具有独特的选择性。由于这款色谱柱的保留性更低，用户可以通过调整流动相来改善分离效果，还可以通过使流动相变性，对脱氨基异构体提供特有的分离选择性。

Gen Pak FAX弱阴离子交换树脂在许多应用示例中均表现出优异的分离能力、更高的回收率，并且对蛋白质、寡核苷酸和核酸具有独特的选择性。由于这款色谱柱的保留性更低，用户可以通过调整流动相来改善分离效果，还可以通过使流动相变性，对脱氨基异构体提供特有的分离选择性。

应用纪要

Gen Pak

Cas蛋白质会与sgRNA形成核糖核蛋白(RNP)复合物。在药物开发过程中评估RNP的络合效率和络合强度至关重要。相关药物成分的纯度检测也很重要。有一种新方法介绍了如何通过联用阴离子和阳离子交换色谱，基于固有电荷轻松分离这三种组分。

Cas蛋白质会与sgRNA形成核糖核蛋白(RNP)复合物。在药物开发过程中评估RNP的络合效率和络合强度至关重要。相关药物成分的纯度检测也很重要。有一种新方法介绍了如何通过联用阴离子和阳离子交换色谱，基于固有电荷轻松分离这三种组分。

应用纪要

蛋白质

AEX提供了一种直接测量方法，能够在纯度检测中分离和定量质粒亚型。AEX根据质粒构象中存在的电荷密度差异分离超螺旋(SC)、开环(OC)和线性(L)质粒。例如，超螺旋DNA的负电荷密度高于更松弛的开环或线性DNA，从而与Protein-Pak Hi Res Q带正电荷的固定相发生更强的相互作用。

AEX提供了一种直接测量方法，能够在纯度检测中分离和定量质粒亚型。AEX根据质粒构象中存在的电荷密度差异分离超螺旋(SC)、开环(OC)和线性(L)质粒。例如，超螺旋DNA的负电荷密度高于更松弛的开环或线性DNA，从而与Protein-Pak Hi Res Q带正电荷的固定相发生更强的相互作用。

应用纪要

AEX

在AAV基因治疗药物等的生物制造过程中，必须监测病毒衣壳中DNA载荷的包封效率。有很大一部分衣壳可能不含所需的转基因，因此不能带来相应的治疗获益。阴离子交换方法利用载体内存在的转基因所增加的负电荷，在功能上分离空衣壳和满衣壳。

在AAV基因治疗药物等的生物制造过程中，必须监测病毒衣壳中DNA载荷的包封效率。有很大一部分衣壳可能不含所需的转基因，因此不能带来相应的治疗获益。阴离子交换方法利用载体内存在的转基因所增加的负电荷，在功能上分离空衣壳和满衣壳。

应用纪要

AAV

mRNA的蓬勃发展催生出新的需求：要利用灵敏且耐用的分析方法表征RNA药物和疫苗候选物的生物物理特性。对于完整mRNA分析，可以在低温下采用烷基铵盐梯度，使mRNA的自身结构得以保留，以便评估异质性并快速测定样品浓度。这些技术经过优化后还可以监测体外转录反应进程。

mRNA的蓬勃发展催生出新的需求：要利用灵敏且耐用的分析方法表征RNA药物和疫苗候选物的生物物理特性。对于完整mRNA分析，可以在低温下采用烷基铵盐梯度，使mRNA的自身结构得以保留，以便评估异质性并快速测定样品浓度。这些技术经过优化后还可以监测体外转录反应进程。

应用纪要

储备分子-mRNA 链

数据说明一切

数据说明一切

观察到在与Cas9蛋白质形成复合物后存在稍微过量的sgRNA。分别在260 nm（黑色）和280 nm（红色）波长下监测络合过程。

使用不同AEX色谱柱获得的寡核苷酸dT ladder的UV色谱图(260 nm)。盐梯度分离在30 ˚C下进行，流动相由20 mM Tris pH 8缓冲液组成，流速0.72 mL/min，NaCl梯度10分钟从300增加至600 mM。

ΦX174质粒亚型（L、O、SC）在Waters Protein-Pak Hi Res Q色谱柱上的分离。20 mM Tris pH 7.4，四甲基氯化铵在10 min内从1.69 M增加至1.75 M。流速：0.4 mL/min。

使用优化的AEX方法定量各种空衣壳和满衣壳混合物中的空衣壳百分比。

Cas9 mRNA (A)和EPO mRNA (B)的离子交换分离结果，使用AEX色谱柱、Tris缓冲流动相和氯化钠梯度结合一系列不同的柱温(30~60 °C)。

使用Gen-Pak FAX (WAT015490)分离18 mer寡核苷酸的结果，证明采用经过优化的高有机相方法可有效分离N-1、N+1和可疑脱氨基杂质(X)。Nercessian, L., et al.(2024).评估弱阴离子交换色谱法用于治疗性寡核苷酸纯度分析的稳定性。Journal of Chromatography A, 1736, 465412.

网络研讨会和资源

  • How-to Video

有关核酸阴离子交换和体积排阻分析方法的新见解

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抗体偶联药物表征指南

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分离解决方案加速推进新一代基因疗法研发

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