Colonnes GTxResolve SEC

Analyses quantitatives multiattributs de plateforme grâce à la combinaison de technologies SEC/MALS

Les virus adéno-associés (AAV) et d’autres vecteurs viraux s’avèrent prometteurs pour le traitement de maladies rares. Pour garantir l’innocuité et l’efficacité de ces médicaments, il importe de mesurer leur contenu et les concentrations d’impuretés. La chromatographie d’exclusion stérique (SEC) est une technique de séparation intéressante pour l’évaluation de la quantité des différents composés de l’échantillon.

Cette application illustre l’évaluation des voies biologiques de dégradation d’un AAV à l’aide d’une particule de chimie de surface novatrice et robuste. Grâce à leurs interactions secondaires réduites et à leur grande efficacité, les colonnes GTxResolve SEC 1 000 Å et GTxResolve Premier BEH SEC 450 Å facilitent les analyses et fournissent de nouvelles informations sur la conception des médicaments, constituant dès lors un outil idéal comme point de départ pour les méthodes de plateforme.

Analyse d’intégrité des acides nucléiques de petite à grande taille

Les études d’intégrité impliquant des acides nucléiques de grande taille, tels que l’ARNm, peuvent bénéficier de la rapidité des analyses d’exclusion stérique. Une chromatographie d’exclusion stérique (SEC) réalisée avec une colonne GTxResolve Premier SEC 1 000 Å permet d’obtenir des séparations d’efficacité élevée et d’évaluer rapidement l’intégrité et la stabilité des acides nucléiques de plus grande taille. Dans cette application, la colonne GTxResolve Premier SEC 1 000 est associée à une détection MALS, ce qui démontre l’utilité de la chromatographie SEC à larges pores pour la caractérisation des attributs biophysiques.

Hétérogénéité des LNP avec une technologie à larges pores

Les nanoparticules lipidiques (LNP) sont des vecteurs essentiels pour la délivrance d’ARNm dans les vaccins et les thérapies géniques. Cette application utilise la colonne GTxResolve SEC 2 000 Å de Waters avec des particules MaxPeak Premier de 3 µm pour comparer l’hétérogénéité des formulations de LNP issues de deux fabricants différents. Le chromatogramme révèle des profils d’élution distincts. Le fabricant 1 présente un pic étroit et symétrique, indiquant une population de LNP relativement homogène. Le fabricant 2 présente un profil d’élution plus large, avec des épaulements supplémentaires et des pics secondaires, ce qui suggère une formulation plus hétérogène avec des granulométries plus élevées. La capacité à distinguer de telles différences met en évidence la sensibilité et le pouvoir de résolution de la colonne, justifiant son utilisation tant dans le développement et dans le contrôle qualité des traitements à base de LNP.

Résolution des plasmides et des vecteurs

La caractérisation des traitements à base d’acides nucléiques nécessite des outils précis, capables de résoudre des espèces d’ADN étroitement apparentées. Ce point est particulièrement important dans les applications où la taille et la topologie influencent directement la puissance, l’efficacité de transfection et la conformité réglementaire. Nous démontrons ici la séparation haute résolution de deux espèces d’ADN circulaire structurellement similaires. Ces molécules sont difficiles à séparer à l’aide de colonnes SEC traditionnelles et, dans cet exemple, la colonne GTxResolve SEC 2 000 Å de Waters permet une résolution de base, en particulier entre le pBR322 et ses espèces apparentées, comme le montre la zone encerclée, distinguant clairement les deux constructions d’ADN.

Caractérisation dimensionnelle d’un vecteur lentiviral (LVV) intact

Les lentivirus, ou LV, sont un type de rétrovirus couramment utilisés comme vecteurs en thérapie génique, en thérapie cellulaire (comme les CAR-T) ou dans le développement de vaccins. Ils sont particulièrement précieux, en raison de leur capacité à intégrer de manière stable du matériel génétique dans des cellules divisantes et non divisantes, permettant ainsi une expression à long terme des gènes thérapeutiques. La caractérisation des LV est essentielle pour garantir leur puissance, leur pureté et leur sécurité.  Elle fournit des informations clés sur l’intégrité, la concentration et l’agrégation des particules, qui sont des éléments essentiels pour développer des thérapies géniques robustes, évolutives et conformes aux exigences réglementaires.  Nous démontrons ici la séparation d’un échantillon de LV traité en aval (temps de rétention de 12 minutes) d’autres protéines fragmentées (temps de rétention entre 14 et 15,5 minutes) générées lors du traitement, à l’aide de la colonne GTxResolve SEC 2 000 Å de Waters, MaxPeak 3 µm.

Étude de la stabilité et de l’intégrité des vaccins à base d’ARNm-LNP

Les scientifiques doivent pouvoir surveiller l’intégrité et la stabilité d’un médicament en raison de leur impact sur l’innocuité et l’efficacité. La reproductibilité, la pureté, la spécificité et la plage linéaire sont quelques-uns des attributs de qualité essentiels pris en compte pour les vaccins à base d’ARNm. La chromatographie d’exclusion stérique (SEC) est une technique bien adaptée à la caractérisation de plus gros agrégats d’ARNm et de LNP dans les vaccins à base d’acides nucléiques. Une étude a été menée sur la cohérence de la teneur en nanoparticules lipidiques (LNP) et de la réponse linéaire de deux formulations de LNP (X1 et X2) issues de deux fabricants différents utilisant la colonne GTxResolve Premier SEC 1 000 Å. Dans les exemples d’applications, la réponse linéaire est mesurée en traçant la surface des pics en fonction de la quantité de LNP injectée dans la colonne GTxResolve Premier SEC 1000.