Colunas de SEC GTxResolve

Quantificação de vários atributos de plataforma com SEC-MALS

O vírus adenoassociado (AAV, Adeno Associated Virus) e outros vetores virais são modalidades promissoras para o tratamento de doenças raras. Para garantir a segurança e a eficácia desses medicamentos, o conteúdo deles, bem como o nível de impurezas, precisam ser medidos. A SEC (cromatografia de exclusão por tamanho) é uma técnica de separação promissora para a avaliação da quantidade dos diferentes componentes da amostra.

Essa aplicação demonstra a avaliação das vias de degradação para um AAV, utilizando uma nova e robusta partícula de química de superfície. As interações secundárias mais baixas e a alta eficiência da Coluna de SEC GTxResolve de 1000 Å e da Coluna de SEC GTxResolve Premier BEH de 450 Å facilitam e esclarecem novas percepções para a formulação de medicamentos e, dessa maneira, podem ser utilizadas como uma ferramenta adequada de ponto de partida para métodos de plataforma.

Análise de integridade para ácidos nucleicos de pequenos a grandes

Os estudos de integridade envolvendo ácidos nucleicos grandes, como mRNA, podem se beneficiar de uma análise rápida de exclusão por tamanho. A SEC com uma Coluna de SEC GTxResolve Premier de 1000 Å possibilita obter separações de alta eficiência e avaliar rapidamente a integridade e a estabilidade de ácidos nucleicos maiores. Nesta aplicação, a Coluna de SEC GTxResolve Premier de 1000 Å é associada à detecção por MALS, o que demonstra a utilidade da SEC de poro largo para a caracterização de atributos biofísicos.

Heterogeneidade de LNP com tecnologia de poro largo

As nanopartículas lipídicas (LNPs, Lipid Nanoparticles) são transportadoras essenciais para a distribuição de mRNA em vacinas e terapias genéticas. Esta aplicação utiliza a Coluna de SEC Waters GTxResolve de 2000 Å com partículas MaxPeak Premier de 3 µm para comparar a heterogeneidade de formulações de LNP de dois fabricantes diferentes. O cromatograma revela perfis distintos de eluição: O Fabricante 1 mostra um pico estreito e simétrico, indicando uma população de LNP relativamente homogênea. O Fabricante 2 apresenta um perfil de eluição mais amplo, com subpicos adicionais e picos secundários, sugerindo uma formulação mais heterogênea com tamanhos de partículas maiores. A capacidade de definir o perfil de tais diferenças destaca a sensibilidade e o poder de resolução da coluna, corroborando sua utilização tanto no desenvolvimento quanto no controle de qualidade de terapias à base de LNP.

Resolução de plasmídeos e vetores

A caracterização de terapias de ácido nucleico requer ferramentas precisas, capazes de resolver espécies de DNA estreitamente relacionadas. Isso é especialmente importante em aplicações em que o tamanho e a topologia influenciam diretamente na potência, na eficiência de transfecção e na conformidade regulatória. Aqui, demonstramos a separação de alta resolução de duas espécies de DNA circulares estruturalmente semelhantes. É difícil separar essas moléculas utilizando colunas de SEC convencionais e, neste exemplo, a Coluna de SEC Waters GTxResolve de 2000 Å atinge a resolução de linha de base, especialmente entre pBR322 e suas espécies relacionadas, como destacado na região circulada, além de distinguir claramente entre as duas estruturas de DNA.

Caracterização do tamanho de um vetor lentiviral intacto (LVV)

Os lentivírus (LVs) são tipos de retrovírus amplamente utilizados como vetores em terapia genética, terapia celular (como a CAR-T) e no desenvolvimento de vacinas. O que os torna particularmente importantes é sua capacidade de integrar de forma estável o material genético em células que se dividem e que não se dividem, permitindo a expressão de longo prazo de genes terapêuticos. A caracterização de LV é fundamental para garantir sua potência, pureza e segurança.  Ela fornece percepções-chave sobre integridade, concentração e agregação de partículas, que são fundamentais para o sucesso no desenvolvimento de uma terapia genética robusta, escalável e em conformidade regulatória.  Aqui, demonstramos a separação de uma amostra de LV processada a jusante (Rt de 12 min) de outras proteínas fragmentadas (Rt de 14-15,5 min) geradas durante o processamento utilizando a Coluna de SEC Waters GTxResolve de 2000 Å, MaxPeak Premier de 3 µm.

Estudos de estabilidade e integridade de medicamentos para vacinas baseadas em mRNA-LNP

Os cientistas devem monitorar a integridade e a estabilidade de medicamentos, devido às implicações na segurança e na eficácia. Reprodutibilidade, pureza, especificidade e intervalo linear são alguns dos atributos de qualidade essenciais considerados para as vacinas baseadas em mRNA. A cromatografia de exclusão por tamanho é uma técnica adequada para a caracterização de agregados maiores de mRNA e LNP em vacinas à base de ácido nucleico. A consistência do conteúdo de nanopartículas lipídicas (LNP, Lipid Nanoparticle) e a resposta linear de duas formulações de LNP (X1 e X2) de dois fabricantes diferentes utilizando a Coluna de SEC GTxResolve Premier de 1000 Å foi investigada. Nas aplicações do exemplo, a resposta linear é medida traçando a área do pico em relação à quantidade de LNP injetada na Coluna de SEC GTxResolve Premier 1000.