蛋白质反相色谱柱

反相色谱

蛋白质反相色谱分析是一种基于蛋白质在溶液中的相对疏水性的分离技术,分析时使用装填有短链键合相的大孔径颗粒(例如,300Å)的色谱柱。如果使用离子对试剂(例如0.1% TFA)来尽可能减少不良离子干扰,通常利用逐渐升高的有机溶剂浓度梯度来控制分离。一般来说,洗脱顺序取决于蛋白质或蛋白质亚基的疏水性,疏水性最弱的蛋白质将首先洗脱出来。此外,颗粒组成(硅胶vs杂化颗粒)、孔径、键合相类型和密度,以及分离条件(例如梯度持续时间、分离温度、流速)等等对于实现满足应用要求的分离而言也非常重要。

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