Аналитические и препаративные колонки

UPLC Columns

ACQUITY APC Columns

Колонки Trefoil и Torus ACQUITY UPC2

T3 Columns

UHPLC Columns

Column Performance and Data Management

Bioseparations Columns & Consumables

Nano and Micro LC Columns

VanGuard Column Protection

GPC & GFCколонки

Column Advisor

Column Comparison Chart

PREMIER Columns

Technologies

Режимы разделения

Обращено фазная хроматография

Обращеннофазная хроматография является наиболее популярной в ВЭЖХ разделениях, и эта популярность отражает появление огромного числа вариантов колонок, производимых на сегодняшний день лидером в области ВЭЖХ – компанией Waters.

В самой простой своей форме обращеннофазная хроматография включает полярную подвижную фазу, типичную смесь воды или буфера с полярным растворителем, таким как метанол, ацетонитрил или тетрагидрофуран и неполярную стационарную фазу, такую как длинноцепочечный углерод, связанный с кремнием или гибридные варианты. В предыдущие годы все исследования и развитие в области разделений были направлены на получение высокой колоночной эффективности, pH стабильности и обеспечения альтернативной селективности.

Современная колоночная химия компании Waters может быть классифицирована на три категории:

  • Гибридная фаза – Разработана для максимальной pH стабильности. Доступна в брендах XBridge™, ACQUITY® BEH и XTerra®. pH от 1 до12.
  • Силика – Исторически наиболее популярная фаза, SunFire™ и Symmetry® продукты синтезируются на заводах в Таунтоне для максимальной загрузки. pH от 2 до 7
  • Специфическая – разработана для специфических применений, как например колонки Atlantis® для увеличения удерживания полярных молекул.

Нормально фазная хроматография

Перед развитием обращеннофазной хроматографии, нормальнофазная была наиболее популярной. Она основана на взаимодействии неполярного элюента и полярной группы, привитой к поверхности сорбента. Нормально фазная хроматография является одним из сильных методов разделения, может быть использован широкий спектр растворителей, однако многие хроматографисты отказываются от нее в силу ряда возникающих сложностей, таких как долгое время калибровки, проблемы с воспроизводимостью, из за присутствия небольших концентраций полярных примесей в подвижной фазе. Однако если контролировать процесс, то Вы получите прекрасные хроматограммы.

Нормально фазные колонки доступны в семействе SunFire, Nova-Pak и Spherisorb.

HILIC (Гидрофильная хроматография)

Гидрофильная хроматография используется уже давно, однако термин HILIC стал использоваться относительно недавно. Анализируются очень полярные соединения, такие как полярные метаболиты, карбогидраты или пептиды.

Подвижная фаза является смесью воды или буфера (< 40%) с органическим растворителем. Стационарная фаза – гидрофильные полярные адсорбенты такие как кремний , связанные полярные фазы, полярные полимерные соединения, ионообменники. Данные фазы легко адсорбируют воду, отсюда название «гидрофильная».

Данная технология становится популярной, в связи с этим увеличиваются исследования в области химии колонок.

Waters HILIC колонки доступны в семействах колонок Atlantis, XBridge и ACQUITY®.

Ионообменная хроматография

Позволяет разделять ионы и полярные молекулы на основании зарядов разделяемых молекул. Данный вид хроматографии позволяет разделить практически любые заряженные молекулы, в том числе: крупные – белки, малые – молекулы нуклеотидов и аминокислот. Часто ионообменная хроматография используют как первый этап очистки белков. Ионообменная хроматография позволяет разделить молекулы, основываясь на ионных взаимодействиях. Неподвижная фаза имеет заряженные функциональные группы, которые взаимодействуют с анализируемыми ионизированными молекулами противоположного заряда. Этот вариант хроматографии классифицируется на два типа — катионную и анионную ионообменную хроматографию. Разделение ионов регулируют подбором оптимальных значений рН элюента. Варьируя рН элюента, можно резко изменять степень ионизации компонентов разделяемой смеси и, следовательно, время их удерживания, добиваясь необходимой селективности разделения.

Гель фильтрационная, эксклюзивная хроматография

Принцип разделения в таких системах несколько иной, чем в предыдущих случаях. Неподвижной фазой являются материалы, обычно гели, со строго контролируемой пористостью, в результате чего одни компоненты смеси в соответствии с размером и формой молекул могут проникать между частицами геля, а другие не могут. Наиболее часто этот вид хроматографии используется для разделения высокомолекулярных соединений. Один из вариантов применения этого метода – определение молекулярных масс разделяемых веществ, часто необходимых для химических исследований.

Аффинная хроматография

Метод очистки и разделения белков, основанный на их избирательном взаимодействии. с лигандом, ковалентно связанным с инертным носителем. В качестве лигандов используют соединения, взаимодействие которых с разделяемыми веществами основано на биологической функции последних. Так, при разделении ферментов (для чего преимущественно и применяется аффинная хроматография) лигандами служат их субстраты, ингибиторы или коферменты. Главная особенность, которая обусловливает высокую эффективность аффинной хроматографии, состоит в том, что разделение основано на различии не физико-химических признаков молекулы (заряда, формы и размера), а специфических. функциональных свойств, отличающих данный фермент от множества других биополимеров. Неподвижная фаза представляет собой специально получаемый сорбент, построенный обычно по схеме: носитель - соединяющее звено ("ножка") - специфический. лиганд. Носителем служит чаще всего сефарозапроизводное агарозы, имеющее поперечные сшивки. Присоединение к ней лиганда или "ножки", содержащих, как правило, аминогруппу, осуществляется после активации сефарозы бромцианом.

Хроматография гидрофобного взаимодействия

Жидкостная хроматография на неполярных сорбентах, в которой в качестве подвижной фазы используются водные или водно-органические буферные растворы и разделение смеси веществ происходит в результате различия в их взаимодействии с гидрофобными группами сорбента в условиях убывающего градиента солей в элюенте. Обеспечивает высокое разрешение и сохраняет биологическую активность.

`