Chromatographie Liquide en Phase Inverse
De nos jours, la chromatographie liquide en phase inverse est, de loin, le mode de séparation le plus utilisé par les laboratoires. La large gamme de colonnes Waters actuellement disponible répond à ces besoins croissants.
Pour simplifier, la chromatographie en phase inverse se compose d’une phase mobile polaire (en général un mélange d’eau et de tampon) à laquelle un solvant polaire (tel que le méthanol, l’acétonitrile ou le tétrahydrofurane) est ajouté et d'une phase stationnaire apolaire (chaîne carbonée de longueur variée, greffée à un support de silice ou hybride). Ces dernières années, nos efforts en matière de Recherche & Développement se sont concentrés sur les phases stationnaires dans le but d'améliorer l'efficacité des colonnes, la stabilité vis-à-vis du pH et la sélectivité.
Nos colonnes peuvent être classifiées de manière générale en trois catégories:
Hybrides – Elles sont conçues pour offrir une stabilité optimale vis-à-vis du pH et un maximum de souplesse pour le développement de méthodes. Les colonnes XBridge™, ACQUITY® BEH et XTerra® peuvent être utilisées avec des phases mobiles dont le pH est compris entre 1 et 12.
- Silice – Il s’agit du support traditionnellement le plus utilisé en phase inverse. Les colonnes SunFire™ et Symmetry® sont fabriquées dans notre usine de Taunton et sont développées pour fournir une excellente capacité de charge lorsque le pH est compris entre 2 et 7.
Spécifiques d’une application donnée – Ces colonnes sont conçues pour répondre aux exigences d’application particulières. Les colonnes Atlantis®, par exemple, sont destinées à améliorer la rétention des composés polaires.
Chromatographie Liquide en Phase Normale
Avant que les phases greffées ne soient développées pour la chromatographie en phase inverse, la chromatographie en phase normale constituait le mode de séparation la plus utilisé. Cette technique repose sur l’interaction des composés avec des groupes polaires fonctionnels présents à la surface de la phase stationnaire. Cette interaction augmente avec l’utilisation de phases mobiles à base de solvants non polaires.
La chromatographie en phase normale est une technique de séparation très puissante en raison du grand nombre de solvants qui peuvent être utilisés pour obtenir une sélectivité idéale lors d’une séparation. Cependant, cette méthode est tombée en défaveur auprès des chromatographistes en raison de certaines complications. En effet, dans certaines conditions, il est possible de rencontrer des temps d’équilibrage très longs ou une mauvaise reproductibilité qui sont dus en grande partie à la sensibilité de la méthode ou à la présence de faibles concentrations de contaminants polaires dans la phase mobile. Lorsque ces problèmes sont maîtrisés, la méthode fournit des chromatogrammes de qualité supérieure aux méthodes en phase inverse en raison de la faible viscosité des solvants habituellement utilisés.
Nos colonnes en phase normale sont actuellement disponibles parmi nos gammes SunFire, Nova-Pak et Spherisorb.
Chromatographie d’interaction Hydrophile (HILIC)
La chromatographie d’interaction hydrophile est une méthode utilisée depuis longtemps mais le terme HILIC n’est rentré que récemment dans le langage courant. Elle se prête particulièrement à l’analyse de composés extrêmement polaires tels que les métabolites polaires, les glucides ou les peptides.
Le mode HILIC est également appelé «phase normale aqueuse». Les phases mobiles utilisées sont un mélange d’eau, de tampon (< 40%) et de solvants organiques. Les phases stationnaires sont des supports polaires présentant une forte hydrophilie tels que la silice, les phases polaires greffées, les polymères polaires et les échangeurs d’ions. Toutes ces phases stationnaires ont pour dénominateur commun leur facilité à adsorber l’eau, c’est-à-dire qu’elles présentent une forte hydrophilie.
Les méthodes du gradient utilisées en mode HILIC sont exactement à l'opposé de celles appliquées en phase inverse. Ce mode est également appelé «phase inverse inversée» puisqu’il est composé de solvants fortement organiques (en règle générale 95 %) qui deviennent progressivement très aqueux.
Cette méthode devenant de plus en plus populaire, la recherche sur les colonnes et leur procédé de remplissage s’accélère.
Nos colonnes HILIC sont actuellement disponibles parmi nos gammes Atlantis, XBridge et ACQUITY®.
