Sistema ACQUITY UPLC M-Class com tecnologia 2D

Expansão do impacto do 2D abrangente

A LC 2D abrangente convencional utiliza a troca iônica (IEX, Ion Exchange) seguida pela fase reversa (RP, Reversed Phase). Qualquer abordagem de IEX utilizará tampões contendo sal que podem causar problemas no background de ionização e de acúmulo se entrarem em um espectrômetro de massas (MS). Como as separações IEX são baseadas unicamente na carga do peptídeo, a dimensão IEX frequentemente resulta em baixa resolução cromatográfica com os peptídeos aparecendo em frações múltiplas, tornando difícil a interpretação dos dados.

A abordagem 2D aprimorada do Sistema ACQUITY UPLC M-Class com tecnologia 2D utiliza RP em pH 10 na primeira dimensão, seguida por RP em pH 2 na segunda dimensão para resultados que excedem em muito os das metodologias IEX convencionais.

Identificações confiáveis para a melhor reprodutibilidade da categoria

Com a resolução LC 2D do Sistema ACQUITY UPLC M-Class com tecnologia 2D, seu laboratório pode ver um número maior de identificações confiáveis, incluindo identificações reprodutíveis e incrementais de proteínas com base em LC 2D. Isso resulta em melhores identificações, quantificação e cobertura de sequência de proteínas. 

Alta resolução em ambas as dimensões

Utilizar IEX como a primeira dimensão de separação com frequência resulta em baixa resolução e sangramento entre frações. Utilizar um suporte de alta resolução na primeira etapa fornece ao seu laboratório informações melhores na última etapa. Com o suporte de fase reversa em pH 10 seguido por uma separação abaixo de 2 mícrons em pH mais baixo com o Sistema ACQUITY UPLC M-Class com tecnologia 2D, é possível obter separações ortogonais úteis que produzem dados de alta qualidade.

Resolução aumentada significa melhores identificações de proteínas

Nesta separação, o poder da LC 2D abrangente para a resolução de amostras proteômicas complexas é demonstrado por este digesto tríptico de E. coli. Utilizando o Sistema ACQUITY UPLC M-Class em uma dimensão, 0,5 µg foram carregados na coluna para analisar e identificar 365 proteínas a partir de 2874 peptídeos. A identificação de 7661 e 9415 peptídeos a partir das separações de 5 etapas e 10 etapas, respectivamente, foi obtida pela adição de 2,5 µg ao sistema LC 2D, resultando em maior cobertura de proteínas com alta confiança nos resultados.

Com a LC 2D e o Sistema ACQUITY UPLC M-Class, os laboratórios podem identificar o dobro de proteínas com mais segurança, recuperar mais peptídeos e obter maior cobertura de proteínas com alta confiança nos resultados.