Columnas y patrones AEX para terapia génica

Se observó que el sgRNA estaba presente en un ligero exceso después de la formación de complejos con la proteína Cas9. La complejación se supervisó tanto a 260 nm (negro) como a 280 nm (rojo).

Cromatogramas UV (260 nm) obtenidos para una escalera de oligo dT utilizando varias columnas AEX. Las separaciones en gradiente de sales se realizaron a 30 ˚C con un caudal de 0,72 mL/min, fase móvil con tampón Tris de 20 mM a pH 8 y un gradiente de 10 minutos que va desde NaCl de 300 mM a 600 mM.

Separación de las isoformas plasmídicas ΦX174 (L, O, SC) en una columna Protein-Pak Hi Res Q de Waters. Tris de 20 mM a pH 7,4, 1,69-1,75 M de cloruro de tetrametilamonio en 10 min. Caudal: 0,4 mL/min.

Cuantificación del % de cápside vacía en varias mezclas de cápside vacía y completa mediante el método AEX optimizado.

Separaciones por intercambio iónico de ARNm de Cas9 (A) y ARNm de EPO (B) utilizando una columna AEX, una fase móvil con tampón Tris y un gradiente de cloruro de sodio combinado con una serie de temperaturas de columna diferentes entre 30 y 60 °C.

Separación de un oligonucleótido de 18 meros en la columna Gen-Pak FAX (WAT015490), destacando la separación eficiente de las impurezas N-1, N+1 y las presuntas impurezas desaminadas (X) con un método optimizado de alto contenido orgánico. Nercessian, L., et al. (2024). Evaluación de la robustez de un método de cromatografía de intercambio aniónico débil para el análisis de pureza de oligonucleótidos terapéuticos. Journal of Chromatography A, 1736, 465412.