Oasis PRiME HLB カートリッジによる食肉抽出物の効果的なクリーンアップ

中性脂質とリン脂質は装置やカラムの汚染を引き起こす可能性があります。本研究では、Oasis PRiME HLB カートリッジを用いて、LC-MS 分析の前処理として食肉抽出物中の中性脂質やリン脂質を迅速に除去する方法を実証します。

利点

Oasis PRiME HLB カートリッジによる UPLC-MS 分析に先立つ効果的な食肉抽出物からの迅速クリーンアップの成果を示します。

ウォーターズは動物用医薬品の LC-MS/MS 多成分スクリーニングに最適な前処理と分析方法を開発しました。典型的な食肉サンプル中の主要成分は水分（最大 70%）、タンパク質（15～25%）、中性脂質（5～25%）、リン脂質（1～3%）になります。食肉から分析種を溶媒抽出する段階で、沈殿と遠心分離によってタンパク質は除去されます。しかし、リン脂質を含む総脂質の多くは目的の残留動物用医薬品成分と共抽出されます。これまでの LC-MS 分析においてはこれらの共抽出成分が、分析カラムや他の UPLC システムの構成部品を汚し、質量分析計も汚染していました。従来、食肉抽出物の脱脂は面倒なヘキサンによる処理を行うか、C₁₈ シリカなどの固相抽出で行われていました。これらのテクニックは中性脂質の除去に効果はありますが、どちらもリン脂質除去には十分な効果があるとは言えません。

ソリューション

Oasis PRiME HLB カートリッジによって、パススルー固相抽出（SPE）でクリーンアップが可能です。本手法は食肉抽出物中からの中性脂質とリン脂質両方の除去に非常に効果的です。同様に重要なこととして、Oasis PRiME HLB カートリッジによるパススルー SPE クリーンアップは動物用医薬品の回収率にも良好な結果を与えます。Oasis PRiME HLB カートリッジはヘキサン脱脂法または C₁₈ シリカによるクリーンアップと回収率はほぼ同等ですが、より高いクリーンアップ効率を示します。

抽出：サンプルとして一般的な豚肉（5 g、15% 脂質を含む）に主要な動物用医薬品を添加したものを用いました。ホモジナイズされた豚肉サンプルは 10 mL の抽出溶液（80:20 アセトニトリル/0.2% ギ酸水溶液）と混和し、30 秒間ボルテックスで強く撹拌、30 分間振とう後、12000 rpm で 5 分間遠心分離を行い動物用医薬品を抽出しました。 

Oasis PRiME HLB カートリッジによるクリーンアップ：バキュームマニホールドに Oasis PRiME HLB カートリッジ（3 cc、60 mg）をセットします。このカートリッジはコンディショニングを必要としません。0.5 mL の抽出液遠心上清画分を Oasis PRiME HLB カートリッジに通し、素通り溶液を収集しました。得られた素通り画分は UPLC-MS/MS 分析のために 10 mM ギ酸アンモニウム緩衝液（pH4.5）で 3 倍に希釈してサンプルとしました。

今回検討したパススルークリーンアップ法では、動物用医薬品成分のほとんどにおいて回収率の低下は見られませんでした。絶対平均回収率（その殆どは初めの食肉からの溶媒抽出効率が寄与していると考えられます）は、フェニルブタゾン（32%）以外のすべての試験した化合物について 80% 以上でした。これらの回収率は、C₁₈ シリカカラムによる結果とほぼ同等ですが、リン脂質除去は C₁₈ シリカカラムでは十分とはいえません。UPLC-MS/MS の条件とクロマトグラムを図 1 に示しました。図 2 のクロマトグラムは、Oasis PRiME HLB カートリッジのリン脂質除去に対する有効性を示したものですが、C₁₈ シリカクリーンアップと比較して、90% 以上のリン脂質が除去されます。重量測定法により Oasis PRiME HLB は 90% 以上の共抽出成分を豚肉抽出物から除去する能力があることが確認されました。

• Oasis PRiME HLB は使用前のコンディショニングや平衡化を必要とせず、シンプルなパススルー固相抽出により効率的なクリーンアップが可能でした。
• Oasis PRiME HLB カートリッジはアセトニトリルベースの豚肉抽出物中から 90% 以上の中性脂質と 90% 以上のリン脂質を除去可能でした。
• パススルーモードでご使用した場合、Oasis PRiME HLB カートリッジは分析種の回収率に影響なく、多くの中性脂質とリン脂質を除去可能でした。