Manuale di Base sulla Cromatografia Liquida Preparativa

I parametri fisici rendono pratica la scelta di avere uno strumento dedicato alla purificazione. Durante la preparazione del sistema di purificazione è necessario tenere in considerazione l’automazione, le pompe, le celle di flusso del rivelatore, gli iniettori, il tubo, le colonne e i raccoglitori di frazioni. I sistemi modulari offrono la massima flessibilità e sono progettati per adattarsi man mano che incrementano le esigenze di produttività.

Il livello di automazione dipende spesso dal workflow e dal budget dell’utilizzatore. In genere, i laboratori di avvio e universitari richiedono una bassa produttività e prediligono sistemi manuali o semi-automatici, mentre le grandi aziende farmaceutiche o manifatturiere spesso utilizzano sistemi automatizzati ad alta produttività.

Software e Controllo del Sistema

È necessario un piccolo computer in grado di controllare la velocità di flusso della pompa e la composizione dei solventi nei sistemi binari, ternari e quaternari in modalità isocratica e a gradiente. Il software registra anche i risultati del rivelatore e del raccoglitore di frazioni. A seconda della complessità del pacchetto software, può essere utilizzato anche per eseguire simulazioni di sviluppo di metodi ed elaborare i dati.

Pompe

La pompa o il sistema di erogazione del solvente è il fulcro delle separazioni cromatografiche. Le pompe utilizzate per la cromatografia devono fornire una velocità di flusso priva di impulsi, accurata, precisa e riproducibile indipendentemente dalla comprimibilità del solvente. Una pompa di purificazione viene selezionata in base alla velocità di flusso target che varia da 0,5 mL/min per una purificazione su piccola scala a 150 mL/min o più su larga scala. Le pompe sono in grado di miscelare solventi ad alta pressione (binarie) o a bassa pressione (quaternarie).

I moduli a gradiente binario possono miscelare due solventi diversi che si uniscono in una camera di miscelazione. Questa camera è seguita da uno smorzatore, un secondo miscelatore e una valvola di spurgo. La composizione del solvente risultante è definita dal diverso flusso erogato da entrambi i canali del solvente. Le pompe di miscelazione ad alta pressione sono meno sensibili ai gas dissolti nella fase mobile e in genere non richiedono il degassamento del solvente.

Il risultato è una pompa con un volume del sistema notevolmente ridotto, in grado di fornire prestazioni precise ed equivalenti in entrambe le scale analitiche e preparative.

La pompa quaternaria è in grado di erogare un gradiente fino a 4 solventi diversi e utilizza valvole che si aprono per brevi periodi. Queste valvole consentono di miscelare piccoli volumi di solventi diversi nella giusta proporzione a bassa pressione. Con questa strategia di pompaggio, i gas dissolti possono separarsi e formare bolle che possono causare successivi problemi di compressione, iniezione, separazione e rivelazione nel circuito idraulico. Pertanto, le fasi mobili devono essere degassate utilizzando un degassatore in linea, sparging con elio o degassamento manuale sotto vuoto. Queste pompe garantiscono un dosaggio dei solventi molto accurato e preciso nell’intervallo di velocità di flusso specificato.