Tripsina RapiZyme, calidad de espectrometría de masas (MS)

Tripsina RapiZyme, calidad de espectrometría de masas (MS)

Logre una digestión de proteínas rápida, limpia y completa

Logre una digestión de proteínas rápida, limpia y completa

Las digestiones de proteínas para la proteómica ascendente o el mapeo de péptidos en el sector biofarmacéutico están plagadas de largos tiempos de digestión y complejas compensaciones en el rendimiento. Equilibrar la velocidad y la finalización de la digestión, mientras se mantiene una alta reproducibilidad, pocos artefactos y una cobertura de secuencia completa, también es un desafío constante. Además, la productividad durante el análisis de datos a menudo se ve obstaculizada por mapas desordenados con varios picos no trípticos (rupturas de enlace omitidas, picos de autólisis, divisiones no específicas y picos no coincidentes). Esos numerosos picos pequeños e inesperados requieren una identificación que supone mucho tiempo, lo que ralentiza el trabajo crítico.

La tripsina de RapiZyme, calidad de espectrometría de masas (MS), permite una velocidad y una limpieza de la digestión sin concesiones gracias a su extraordinariamente alta resistencia a la autólisis, su alta pureza y su actividad mejorada. Al eliminar prácticamente la autólisis que afecta incluso a la tripsina más avanzada del mercado, la tripsina RapiZyme se puede utilizar en concentraciones comparativamente altas para lograr digestiones más rápidas sin tener que recurrir a altas temperaturas ni sacrificar la finalización de la digestión. En consecuencia, se mejora el tiempo de respuesta de las muestras, las operaciones del laboratorio y, lo que es más importante, se toman decisiones críticas con confianza y rapidez.

RapiZyme Trypsin used to improve protein digestions for biopharmaceutical peptide mapping or bottom-up proteomics. Tripsina RapiZyme, calidad de espectrometría de masas (MS)
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Especificaciones

Descripción general

  • Logre digestiones eficientes de 30 minutos sin recurrir a altas temperaturas mediante el desbloqueo del uso de relaciones enzima-proteína (E-P) más altas con resistencia a la autólisis
  • Realice análisis de datos más productivos mediante líneas base más limpias
  • Logre una alta cobertura de secuencia para una caracterización e identificación fiables
  • Alcance la reproducibilidad y la previsibilidad como tripsina de secuencia porcina expresada de manera recombinante y optimizada químicamente.
  • Mejore la estabilidad, la recuperación del vial y la actividad tras la reconstitución para un rendimiento consistente mediante la liofilización con un excipiente compatible con LC-MS
  • Robusta y flexible para su uso en diversos protocolos de mejora del flujo de trabajo

Uso recomendado: Para lograr digestiones mejoradas de proteínas para la proteómica ascendente o el mapeo de péptidos en el sector biofarmacéutico.

Cómo funciona RapiZyme

La tripsina RapiZyme es una tripsina recombinante químicamente optimizada. Debido a que no es de origen animal, está libre de quimotripsina contaminante, no requiere tratamiento con inhibidores de L-(tosilamido-2-fenil) etilclorometilcetona (TPCK) y, por lo tanto, está libre de problemas no específicos asociados a la digestión.

Digestiones rápidas

La metilación extensa y homogénea confiere a la tripsina RapiZyme una resistencia a la autólisis extraordinariamente alta. Esto permite el uso de la tripsina RapiZyme en relaciones E-P altas (por ejemplo, 1:5) para lograr digestiones completas en solo 30 minutos, sin tener que recurrir a temperaturas más altas. Con el uso de Remicade® como caso práctico, la tripsina RapiZyme produce picos de autólisis <0,1 % y una ruptura de enlace omitida <1 % (medida como % de la respuesta de TIC total). Una tripsina de un competidor líder en la industria proporciona un 6-7 % de picos de autólisis y un 4-5 % de ruptura de enlace omitida en las mismas condiciones.

Limpiar líneas base

Las decisiones críticas se toman reconociendo los cambios más pequeños en un mapa. Las agencias reguladoras exigen la identificación de cada pico. Los picos no coincidentes, los picos de artefactos, los picos de autólisis y los picos de ruptura de enlace omitidos son ruidos innecesarios y que requieren mucho tiempo. Requieren la revisión y el análisis científicos adicionales, lo que hace que los tiempos de procesamiento del software se disparen cuando se incluyen picos no trípticos o picos de autólisis de un modelo in silico de digestión de tripsina.

Con la tripsina RapiZyme, se puede proceder de forma rápida y segura con excelentes líneas base, sin ruido ni picos de artefactos. Todo con una digestión de 30 minutos.

Reproducibilidad y pureza: ¿Qué contiene la tripsina?

La tripsina RapiZyme recombinante (no derivada de animales) y homogéneamente metilada no contiene quimotripsina contaminante. Además, se liofiliza con un excipiente compatible con LC-MS para que la reconstitución sea fácil y predecible, y mejorar la recuperación del vial.

El resultado es una reproducibilidad excepcional, tanto de un lote a otro, como de una digestión a otra.

Flexible de usar

La tripsina RapiZyme puede hacer todo lo que se espera que haga la tripsina (en solución o inmovilizada) y mucho más. Con la tripsina RapiZyme, se puede:

  • Eliminar la desalinización y mejorar la consistenciapara las aplicaciones de proteómica, bioprocesamiento y monitorización de MAM y PTM. La tripsina RapiZyme mantiene una alta actividad con cantidades moderadas de guanidina HCI
    • Diluir guanidina HCI a 0,5-0,7 M y digerir en 2 horas en una relación enzima-proteína de 1:5 (pH 7,5)
  • Controlar los artefactos para cualquier aplicación en la que se prefiera la digestión durante la noche sin comprometer la eficacia de la digestión
    • Digerir durante la noche con una relación enzima-proteína de 1:100 a temperatura ambiente y pH 6,5
  • Acelerar las digestiones tradicionales de relación enzima-proteína 1:20 a 1-3 horas para proporcionar flexibilidad adicional
  • Calentar y eliminar la necesidad de enzimas inmovilizadas para simplificar o digerir las proteínas con RapiZyme térmicamente estable
    • Digerir con una relación enzima-proteína 1:10 durante 1 hora a 70 °C

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RapiZyme Trypsin, Grado de Espectrometría de Masas (MS), redefine la digestión de proteínas con un equilibrio inigualable de velocidad, limpieza y eficiencia, convirtiéndolo en una herramienta esencial para el mapeo de péptidos biofarmacéuticos y la proteómica de abajo hacia arriba. Diseñado para superar los desafíos comunes de tiempos de digestión prolongados, compensaciones complejas y resultados impredecibles, RapiZyme Trypsin ofrece una solución confiable que acelera los flujos de trabajo, mejora la reproducibilidad y elimina artefactos que consumen tiempo.

Las digestiones de proteínas han luchado tradicionalmente por mantener una alta cobertura de secuencia, bajos artefactos y reproducibilidad sin sacrificar velocidad o limpieza. RapiZyme Trypsin se destaca al ofrecer digestiones rápidas, limpias y completas, gracias a su extensa y homogénea metilación, que confiere una resistencia extraordinariamente alta a la autólisis. Esta característica innovadora permite el uso de altas proporciones de enzima a proteína (E:P), permitiendo digestiones completas en tan solo 30 minutos sin recurrir a temperaturas elevadas o comprometer la calidad de la digestión. Por ejemplo, bajo una proporción E:P de 1:5, RapiZyme Trypsin logra menos del 0.1% de picos de autólisis y menos del 1% de cortes perdidos, una mejora significativa sobre las enzimas competidoras líderes en la industria que producen 6–7% de picos de autólisis y 4–5% de cortes perdidos bajo las mismas condiciones.

Las líneas base limpias son críticas para la toma de decisiones con confianza en entornos regulatorios, donde cada pico debe identificarse con precisión. RapiZyme Trypsin elimina el ruido de picos no coincidentes, artefactos de autólisis y cortes no específicos, asegurando que sus mapas de datos estén libres de distracciones innecesarias. Al reducir significativamente los tiempos de procesamiento y el esfuerzo de revisión científica, RapiZyme Trypsin mejora la productividad y acelera el análisis, permitiéndole centrarse en los conocimientos que más importan.

La reproducibilidad es otro sello distintivo de RapiZyme Trypsin, lograda a través de su formulación recombinante químicamente optimizada (no derivada de animales). A diferencia de la tripsina tradicional, RapiZyme está libre de contaminación por quimotripsina y no requiere tratamiento con inhibidores TPCK, que a menudo introducen desafíos de digestión no específica. La enzima se liofiliza con un excipiente compatible con LC-MS, mejorando la estabilidad, actividad y recuperación del vial mientras asegura un rendimiento predecible y consistente en lotes y digestiones. Esta confiabilidad hace que RapiZyme Trypsin sea una elección ideal para aplicaciones de alto riesgo donde la precisión y la reproducibilidad no son negociables.

RapiZyme Trypsin también es notablemente versátil, adaptándose a una variedad de flujos de trabajo con facilidad. Para necesidades de digestión rápida, puede lograr una digestión completa en 30 minutos con una proporción E:P de 1:5 sin altas temperaturas. Para flujos de trabajo más tradicionales, acelera los tiempos de digestión, permitiendo una digestión completa de proteínas en 1–3 horas con una proporción E:P de 1:20. Incluso las digestiones nocturnas se pueden realizar a temperatura ambiente con una proporción E:P de 1:100, entregando resultados consistentes mientras se evitan artefactos. Además, RapiZyme Trypsin demuestra alta actividad incluso en cantidades modestas de guanidina HCl, permitiendo flujos de trabajo sin desalinización y mayor consistencia para aplicaciones como la Metodología de Múltiples Atributos (MAM), el monitoreo de modificaciones postraduccionales (PTM), el bioprocesamiento y la proteómica.

Cuando la estabilidad térmica es ventajosa, RapiZyme Trypsin admite digestiones a temperaturas elevadas, como digestiones de 1 hora a 70°C con una proporción E:P de 1:10, eliminando la necesidad de enzimas inmovilizadas. Esta flexibilidad extiende su aplicabilidad a una amplia gama de protocolos, convirtiéndolo en una herramienta versátil y poderosa para laboratorios enfocados en mejorar la eficiencia operativa y la calidad de los datos.

RapiZyme Trypsin, Grado MS, establece un nuevo estándar para la digestión de proteínas al combinar velocidad, limpieza y flexibilidad sin comprometer la reproducibilidad o la calidad. Ya sea que esté realizando mapeo de péptidos para presentaciones regulatorias o impulsando flujos de trabajo de proteómica de alto rendimiento, RapiZyme Trypsin ofrece un rendimiento excepcional, permitiéndole tomar decisiones críticas con confianza y precisión.

Preguntas Frecuentes

1. ¿Cuál es la proporción recomendada de enzima a proteína (E:P)?
La proporción óptima de enzima a proteína (E:P) para RapiZyme Trypsin depende de los requisitos de su flujo de trabajo, pero su alta resistencia a la autólisis permite una flexibilidad notable. Para digestiones rápidas, se recomienda una proporción de 1:5, permitiendo una digestión completa en solo 30 minutos sin recurrir a temperaturas elevadas. Para flujos de trabajo estándar, una proporción de 1:20 puede lograr una digestión completa en 1–3 horas, proporcionando un equilibrio entre velocidad y eficiencia. Si prefiere la digestión nocturna, una proporción de 1:100 a temperatura ambiente (pH 6.5) asegura resultados consistentes y libres de artefactos.

2. ¿Para qué aplicaciones es mejor utilizar RapiZyme Trypsin?
RapiZyme Trypsin es ideal para el mapeo de péptidos biofarmacéuticos y la proteómica de abajo hacia arriba. Su resistencia a la autólisis sin igual y su alta pureza lo hacen perfecto para flujos de trabajo que requieren digestión de proteínas rápida, limpia y reproducible. Aplicaciones como la Metodología de Múltiples Atributos (MAM), el monitoreo de modificaciones postraduccionales (PTM) y el análisis regulatorio de péptidos se benefician enormemente de su capacidad para entregar líneas base más limpias y menos picos no triptídicos. Además, la estabilidad y adaptabilidad de RapiZyme Trypsin lo convierten en una herramienta valiosa para aplicaciones de bioprocesamiento y proteómica que demandan precisión, alta cobertura de secuencia y resultados libres de artefactos.