Sistema ACQUITY UPLC M-Class con tecnología 2D

Sistema ACQUITY UPLC M-Class con tecnología 2D

Amplíe el rango dinámico de sus análisis con las separaciones en 2D.

Amplíe el rango dinámico de sus análisis con las separaciones en 2D.

Hasta hace poco, la LC en 2D se consideraba una técnica lenta y difícil de realizar. El sistema ACQUITY UPLC M-Class con tecnología 2D ha optimizado el proceso de separación por LC en 2D mediante una configuración de métodos controlada por menús sumamente intuitiva, químicas de separación normalizadas y un funcionamiento inteligente de las válvulas.

El sistema ACQUITY UPLC M-Class con tecnología 2D amplía el uso de partículas de menos de 2 micras para lograr separaciones de alta capacidad de picos de péptidos. Este innovador sistema utiliza eficazmente UPLC bidimensional (2D) para una mejor resolución cromatográfica de muestras proteómicas complejas mediante un enfoque de doble fase reversa (RP).

ACQUITY UPLC M-Class System with 2D Technology. Sistema ACQUITY UPLC M-Class con tecnología 2D

Especificaciones

Presión máxima de funcionamiento

15 000 psi

Intervalo de pH

De 2 a 10

Intervalo de caudal de operación

De 200 nL/min a 100 µL/min sin división de flujo

Trayectoria del flujo de la muestra

No ferroso

Volumen de inyección

De 0,1 µL a 100,0 µL

Compartimento de muestras

4-40 °C

Opciones de bomba

Binaria

Seguimiento de la columna

Ninguno

Capacidad de columnas

Columna única, de 75 µm a 4,6 mm de diámetro interno (d. i.); hasta 250 mm de longitud

Capacidad máxima de muestras

Hasta 21 placas (con el organizador de muestras)

Opciones de detectores

Detector PDA

Detector TUV

Espectrómetros de masas

Control externo

Software MassLynx

Especificaciones físicas

(µBSM, µSM-FL, TVM)

Ancho: 34,3 cm (13,5 pulg.)

Altura: 69,7 cm (27,4 pulg.)

Profundidad: 71,2 cm (28,0 pulg.)

Descripción general

  • La alta resolución en ambas dimensiones se produce aprovechando el amplio rango de estructura iónica e hidrofóbica de los péptidos.
  • Mejor identificaciones, cuantificación y cobertura de secuencia de las proteínas.
  • Separación mejorada, asistentes de generación de métodos y algoritmos de datos optimizados.

Uso recomendado: Para una mejor resolución cromatográfica de muestras proteómicas complejas.


Encabezado de características

Encabezado de características






Ampliar el impacto del 2D integral

La LC en 2D integral convencional utiliza intercambio iónico (IEX) seguido de fase reversa (RP). Cualquier método de IEX utilizará soluciones tampón que contengan sales que pueden causar un fondo de ionización y problemas de ensuciamiento si entran en un espectrómetro de masas (MS). Dado que las separaciones IEX se basan únicamente en la carga del péptido, la dimensión IEX a menudo da como resultado una resolución cromatográfica deficiente con péptidos que aparecen en varias fracciones, lo que dificulta la interpretación de los datos.

El enfoque 2D mejorado del sistema ACQUITY UPLC M-Class con tecnología 2D utiliza RP a pH 10 en la primera dimensión, seguido de RP a pH 2 en la segunda dimensión, para obtener resultados que superan con creces los de las metodologías IEX convencionales.


Identificaciones seguras para lograr la mejor reproducibilidad de su clase

En función de la resolución de la LC en 2D del sistema ACQUITY UPLC M-Class con tecnología 2D, el laboratorio puede ver un mayor número de identificaciones seguras, incluidas las identificaciones tanto reproducibles como incrementales de proteínas basadas en la LC en 2D. Esto da como resultado una mejor identificación, cuantificación y cobertura de secuencia de las proteínas. 


Alta resolución en ambas dimensiones

El uso de IEX como primera dimensión de separación a menudo da como resultado una resolución deficiente y sangrado entre las fracciones. El uso de un soporte de alta resolución en el primer paso proporciona al laboratorio una mejor información en el último paso. Con el soporte de fase reversa a pH 10 seguido de una separación por debajo de 2 micras a pH más bajo con el sistema ACQUITY UPLC M-Class con tecnología 2D, se pueden obtener separaciones ortogonales útiles que producen datos de alta calidad.


Una mayor resolución equivale a mejores identificaciones de proteínas

En esta separación, esta digestión tríptica de E. coli demuestra la potencia de la LC en 2D integral para la resolución de muestras proteómicas complejas. Utilizando el sistema ACQUITY UPLC M-Class en una dimensión, se cargaron 0,5 µg en la columna para resolver e identificar 365 proteínas a partir de 2874 péptidos. La identificación de los péptidos 7661 y 9415 a partir de las separaciones del paso 5 y paso 10, respectivamente, se obtuvo mediante la adición de 2,5 µg al sistema LC en 2D, lo que dio como resultado una mayor cobertura de proteínas con una alta confianza en los resultados.

Con la LC en 2D y el sistema ACQUITY UPLC M-Class, los laboratorios pueden identificar el doble de proteínas de forma más segura, recuperar más péptidos y lograr una mayor cobertura de proteínas con una alta confianza en los resultados.


Recursos

Documentos

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Asistencia

Asistencia



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Los Sistemas ACQUITY UPLC con Tecnología 2D LC llevan un nuevo nivel de precisión al campo de la química analítica, especialmente en la cromatografía líquida (LC). Mientras que los sistemas LC tradicionales son efectivos para clasificar mezclas complejas de sustancias, pueden tener dificultades cuando se enfrentan a muestras que contienen muchos compuestos estrechamente relacionados.

Así es como funcionan los Sistemas ACQUITY UPLC con Tecnología 2D LC:

Separación de Primera Dimensión: Inicialmente, la muestra se somete a separación utilizando un tipo de cromatografía, que podría centrarse en factores como el tamaño molecular, la polaridad o la hidrofobicidad. El objetivo es descomponer la muestra en sus componentes individuales tanto como sea posible.

Muestreo Integral: Después de la separación de la primera dimensión, se eligen fracciones o picos específicos de interés para un examen más detallado. Este proceso de selección puede involucrar el corte de corazón, donde solo una parte de la separación de la primera dimensión se mueve a la segunda dimensión para un análisis adicional. Alternativamente, el 2D LC integral implica transferir todas las fracciones de la primera dimensión a la segunda para un análisis más exhaustivo.

Separación de Segunda Dimensión: En la segunda dimensión, las fracciones elegidas de la primera dimensión se someten a separación utilizando un mecanismo diferente en comparación con la primera. Esto añade otra capa de resolución, separando aún más cualquier componente que pueda haber co-elucionado en la primera dimensión.

Detección y Análisis: Finalmente, los componentes separados se identifican y cuantifican utilizando métodos como la espectrometría de masas o la espectroscopía UV-Vis. Esto permite la identificación y medición precisa de los compuestos presentes en la muestra.

Al combinar estos dos mecanismos de separación, los Sistemas ACQUITY UPLC con Tecnología 2D LC ofrecen varios beneficios:

Poder de Separación Mejorado: El enfoque bidimensional permite una separación de mayor resolución, particularmente útil para muestras complejas con compuestos que eluyen estrechamente juntos.

Aumento de la Sensibilidad: Al minimizar la interferencia de compuestos co-eluyentes, el 2D LC mejora los límites de detección y cuantificación para los analitos objetivo.

Análisis Integral: Tanto el análisis dirigido de compuestos específicos como el perfilado exhaustivo de mezclas complejas son posibles mediante una combinación de técnicas de corte de corazón y muestreo integral.

Capacidad de Pico Mejorada: La capacidad de separar un mayor número de analitos distintos en un sistema cromatográfico a menudo resulta en una mejor resolución de picos y una identificación más precisa.

En general, los Sistemas ACQUITY UPLC con Tecnología 2D LC sirven como herramientas invaluables para investigadores y científicos en diversos campos como farmacéutica, análisis ambiental, metabolómica y proteómica, donde la caracterización precisa de mezclas complejas es crucial.

Preguntas Frecuentes sobre los Sistemas ACQUITY UPLC con Tecnología 2D LC

1. ¿Qué es la tecnología 2D LC?
La tecnología de cromatografía líquida bidimensional (2D LC) mejora la cromatografía líquida al emplear dos dimensiones de separación independientes para analizar muestras complejas. En 2D LC, los compuestos se separan en la primera dimensión utilizando un método cromatográfico, y se resuelven aún más en la segunda dimensión utilizando un método diferente.
Esto proporciona mayor resolución, selectividad y la capacidad de separar analitos que podrían co-eluir en LC 1D tradicional. Es especialmente beneficioso para mezclas complejas, ofreciendo información detallada sobre matrices desafiantes como muestras biológicas, productos alimenticios y muestras ambientales.

2. ¿En qué se diferencia el Sistema ACQUITY UPLC con Tecnología 2D LC de los sistemas LC tradicionales?
El Sistema ACQUITY UPLC con Tecnología 2D LC amplía la LC tradicional al integrar dos dimensiones cromatográficas independientes en un solo flujo de trabajo. A diferencia de la LC 1D, donde las separaciones ocurren en una sola fase, la 2D LC permite separaciones ortogonales al combinar diferentes químicas o mecanismos de separación en las dos dimensiones. Esta capacidad mejora significativamente la resolución, sensibilidad y selectividad para analitos complejos o de baja abundancia. Además, la 2D LC reduce los efectos de matriz y proporciona un análisis composicional detallado, lo que la hace ideal para aplicaciones en proteómica, metabolómica y farmacéutica.

3. ¿Puede el sistema manejar tanto flujos de trabajo dirigidos como no dirigidos?
Sí, el Sistema ACQUITY UPLC con Tecnología 2D LC admite tanto flujos de trabajo dirigidos como no dirigidos. En análisis dirigidos, el sistema proporciona una separación y cuantificación precisas de compuestos específicos con alta selectividad y sensibilidad. Para flujos de trabajo no dirigidos, el enfoque de doble dimensión permite un perfilado integral de mezclas complejas, permitiendo el descubrimiento de compuestos desconocidos o variaciones sutiles en la composición de la muestra. Esta versatilidad hace que el sistema sea una excelente opción para el desarrollo de métodos, el descubrimiento de biomarcadores y la caracterización integral de muestras.

4. ¿Cuáles son las capacidades de presión y caudal del sistema en modo 2D LC?
El Sistema ACQUITY UPLC con Tecnología 2D LC está diseñado para operar a presiones ultra-altas y admite un control de flujo preciso en ambas dimensiones. Típicamente, la primera dimensión opera a tasas de flujo bajas a moderadas para lograr una separación amplia, mientras que la segunda dimensión utiliza presiones más altas y tasas de flujo más rápidas para una resolución rápida.