• 应用纪要

Oasis PRiME HLB-DisQuE QuEChERS-UPLC-MS/MS测定谷物中真菌毒素

Oasis PRiME HLB-DisQuE QuEChERS-UPLC-MS/MS测定谷物中真菌毒素
  • Michael S. Young
  • Kim Van Tran
  • Waters Corporation
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麦场

摘要

本文将介绍一种改良型QuEChERS提取方案及和简单的净化策略，适用于霉菌毒素的多残留UPLC-MS/MS分析。

简介

目的

本文将介绍一种改良型QuEChERS提取方案及和简单的净化策略，适用于霉菌毒素的多残留UPLC-MS/MS分析。 

背景

真菌毒素是由存在于家畜、饲料和食物上的霉菌或其它真菌产生的一类有毒化合物，摄取的食物仅含ppb (µg/kg)浓度的真菌毒素就有可能引发严重疾病。因此，我们需要灵敏可靠的分析方法来测定食品和饲料中的霉菌毒素。农产品中小麦、大米和玉米等是最易受到污染的谷物，因此也是监测的重点。这些谷物中有许多天然成分都是LC-MS/MS分析的干扰物。虽然蛋白质和淀粉可通过QuEChERS提取过程中的层析、沉淀和离心步骤去除，但是大量脂肪和卵磷脂（磷脂）仍会随目标物霉菌毒素被共同提取出来。

图1.小麦面粉样品中添加了相应浓度的12种真菌毒素的色谱图。
图1.小麦面粉样品中添加了相应浓度的12种真菌毒素的色谱图。 

这些共提物会干扰LC-MS分析、污染色谱柱和UPLC系统、质谱仪。传统方法主要采用正己烷脱脂或使用反相吸附剂（如硅胶C18）去除提取物中的脂肪。尽管这些技术可有效去除脂肪，但它们都无法去除磷脂。

解决方案

使用Oasis™ PRiME HLB小柱进行通过式净化以去除脂肪和磷脂；通过dSPE（分散SPE）净化去除残留的糖类和其它极性物质。应用上述净化方案可以得到满意的回收率。

实验

QuEChERS提取：取市购小麦粉。称取2 g样品，装入50 mL离心管中。加入10 mL水和10 mL甲酸/乙腈(10:90)溶液，将样品置于自动振荡器中振摇1 h。然后加入QuEChERS盐（用于CEN方法的DisQuE提取盐包，部件号186006813），用手大力振摇1 min。离心（3200转/分钟，5 min）后，取出一部分上清液进行净化。

净化：将Oasis PRiME HLB小柱（3 cc，150 mg，部件号186008717）安装在预先清洁过且设置为最小真空度（大约2 psi）的真空萃取装置上。无需执行小柱活化步骤。 取约0.4 mL上清液，使其通过Oasis PRiME小柱并弃去滤液。然后再取1 mL上清液，再次通过小柱并收集滤液。然后将收集到的流出液转移到含有混合吸附剂的2 mL dSPE管（部件号186008081）中。在13500转/分钟下离心1 min，取500 µL上清液，在温和的氮气流中挥干，然后复溶于250 µL乙腈/水(15:85)中。

仪器条件

UPLC-MS/MS仪器条件如右侧所示。表1列出了本应用的目标化合物、MRM多反应监测通道和质谱参数。每种真菌毒素使用空白基质配置标准曲线，在6个不同浓度的范围内具有良好的线性关系，相关系数R2 > 0.99。

UPLC条件

LC系统：

ACQUITY UPLC I-ClassFTN

色谱柱：

CORTECS UPLC T3, 1.6 µm, 100 x 2.1 mm

流动相:

A：含有0.5%甲酸和5 mM甲酸铵的水溶液

B：含有0.5%甲酸和5 mM甲酸铵的甲醇/乙腈(50:50)溶液

进样体积：

10 μL

柱温：

30 °C

洗针液和样品管理器冲洗液：

1%甲酸，10 mM柠檬酸的水溶液/甲醇/异丙醇/乙腈(1:1:1:1)

密封清洗液：

甲醇:水(10:90)

Gradient

梯度

MS条件

质谱仪：

Xevo TQ-S micro

离子源：

ESI+

离子源温度：

150 °C

脱溶剂气温度：

500 °C

脱溶剂气流速：

1000 L/h

锥孔气流速：

30 L/h

数据管理系统：

MassLynx 4.1版

结果与讨论

本应用测定了12种毒素在低浓度和高浓度下的回收率。高浓度为欧盟规定的黄曲霉毒素、伏马菌素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的最高允许浓度，以及T2和HT2毒素的推荐浓度（见图1）。低浓度为高浓度的1/4（黄曲霉毒素的浓度为0.25 ng/g）。小麦面粉中在低浓度和高浓度加标样品中除玉米赤霉烯酮（回收率在73%）外，所有目标化合物的方法回收率均大于80%。大米和玉米面粉样品的结果与之相当。  

应用通过式净化或dSPE净化步骤对真菌毒素的损失极小。图1显示了加标浓度为1 ng/g (ppb)黄曲霉毒素的小麦面粉样品的色谱图。图2为Oasis PRiME小柱去除磷脂的效率的比较色谱图；显示了使用Oasis PRiME小柱成功去除了95％以上的磷脂和80%以上的总脂肪。

图2.使用Oasis PRiME HLB进行通过式净化；几乎完全去除了小麦面粉QuEChERS提取物中的磷脂。
图2.使用Oasis PRiME HLB进行通过式净化；几乎完全去除了小麦面粉QuEChERS提取物中的磷脂。

结论

  • 实验证明，经改良的QuEChERS提取方案能够有效地从小麦、大米和玉米面粉中同时提取出12种真菌毒素。
  • 使用Oasis PRiME HLB小柱进行通过式净化可有效去除QuEChERS提取液中80％以上的脂肪和95％以上的磷脂。
  • 使用混合吸附剂的dSPE净化能有效去除QuEChERS提取液中的极性共提取物。
  • 按本应用进行样品制备，并使用Xevo TQ-S micro质谱仪进行LC-MS/MS分析，可满足欧盟法规标准的定量限LOQ的要求。

特色产品

可在线购买：

720005893ZH，2018年3月

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