使用UPLC-MS/MS测定保存口腔液中的cTHC

本应用简报介绍了一种简单的UPLC-MS/MS方法，该方法可用于分析保存口腔液中低pg/mL浓度的cTHC，并且可以进行确认分析，因此能够为各种法医检测计划或路边药物检测(roadside drug testing)计划提供支持。

优势

一种简单、灵敏的UPLC-MS/MS方法，适用于测定用Quantisal口腔液收集装置收集的口腔液中的cTHC。

背景

分析口腔液中的低浓度药物已成为世界各地许多法医学实验室的一项重要需求。过去十年来，口腔液被广泛用作法医检测和路边检测的一种生物基质。与测定尿液相比，测定口腔液中是否存在母体药物可以更好地指示受试对象当前的身体受损或中毒情况，而且对于某些药物成分来说，口腔液中的药物水平是非常便捷的标志物，可以代表血液中的循环水平。口腔液采集是一种非侵入性技术，采样过程不涉及类似于尿样采集的隐私和掺假问题，而与血样采集相比，口腔液采集不需要由经过医学培训的人员执行。Quantisal口腔液收集装置（Immunalysis，美国）可将1 mL样品收集到稳定缓冲液中，提高样品转运至检测实验室这个过程中的稳定性。 

大麻是全球使用相当广泛的一种违禁物质，长期使用可能成瘾。大麻素是最常检出的非法药物之一，因此其分析对于法医检测而言极其重要。

Δ-9-四氢大麻酚(THC)是大麻植株中存在的主要精神活性成分，可产生一系列代谢物，其中就包括11-去甲-9-羧基-Δ-9-四氢大麻酚(cTHC)。测定口腔液中cTHC的优势在于，大麻烟雾中检测不到cTHC，因此它能反映主动摄入大麻的情况。鉴于此，监测这种代谢物就变得非常重要，因为它有助于区分主动摄入大麻与被动暴露于环境中的大麻烟雾的情形。然而，这种代谢物通常只能达到低pg/mL浓度水平，分析难度相当大，因此需要采用高灵敏度的分析技术。

样品收集：

使用Quantisal口腔液收集装置，按照制造商的说明收集口腔液对照样品。一般认为，口腔液被采集到收集装置中后，会被装置内的缓冲液稀释四倍，本技术简报中提到的浓度以纯口腔液中的浓度为准。样品收集完成后，在4 ℃下储存至少24 h以备分析。 

样品前处理和UPLC-MS/MS分析：

保存口腔液对照样品中加入浓度相当于纯口腔液中20 pg/mL的分析物。采用液-液萃取法从样品中萃取cTHC。挥干含有cTHC的有机层后，将样品复溶于50%乙腈中。 

ACQUITY UPLC I-Class FTN系统配备50 µL扩充定量环，可分析25 µL样品；在CORTECS C₁₈色谱柱上使用水/乙腈梯度分离cTHC。

监测cTHC的两个MRM通道：343.2 > 245.2（定量离子）和343.2 > 191.1（定性离子）。使用通道346.2 > 248.2监测内标(cTHC-d3)。 

在本技术简报中，我们使用ACQUITY UPLC I-Class/Xevo TQ-S micro联用系统检测浓度非常低的cTHC。

保存口腔液萃取物对照（空白）样品与保存口腔液萃取物加标样品的对比如图1所示。图中显示了两个样品经平滑处理和积分后的定量离子MRM谱图。

两个MRM通道的信噪比（未经平滑处理的原始数据的峰到峰数据）以及同等浓度无基质标准品的信噪比如图2所示。

随着口腔液在法医检测和路边药物检测中的应用越来越广泛，人们迫切需要一种快速、灵敏、准确、可靠且稳定的方法来定量分析这种常用生物基质中的违禁药物。将保存口腔液作为检测对象，能以简单、受控且非侵入性的方式采集基质，而且口腔液中含有这类检测方案通常需要测定的各种分析物。

本研究表明，Xevo TQ-S micro的分析灵敏度足以检测保存口腔液中低pg/mL浓度的cTHC。