掺入四氢大麻酚的混合药物组分析方法 - 应用于市面上的三款唾液收集装置

本应用简报介绍了利用Waters Oasis MCX 96孔µElution板开发可应用于不同的口腔液收集装置的样品制备方法，用于分析含有四氢大麻酚(THC)的混合药物组。

优势

使用单一样品前处理方法处理包含THC的口腔液混合分析物组

分析口腔液中的低浓度药物已成为世界各地许多法医学实验室的一项重要需求。市面上有许多口腔液收集装置，使用这些装置能够以非侵入性但又符合监管要求的方式收集口腔液样品，操作非常简单。这些装置能为实验室提供纯口腔液样品或添加了不同防腐剂缓冲液的口腔液样品。由于收集装置未实现标准化，人们迫切需要能与所有常用收集装置配套使用，并且能萃取出所有分析物的样品制备策略。这些方案最常被用于检测THC，但是，许多其他类别的药物（例如鸦片制剂、阿片类药物、安非他命类药物和苯二氮卓类药物）也有必要进行测定，并且由于样品体积可能有限，必须使用单一样品制备方法进行处理。Oasis MCX µElution能够从这些成分复杂且体积有限的基质中萃取出所有这些分析物，而且萃取效率足够高，可满足现行指导原则的要求（例如欧洲工作场所药物检测协会(EWDTS)指导原则）¹。

本研究所用的口腔液收集装置包括：购自Sarstedt的Salivette口腔液收集装置、购自Immunalysis的Quantisal口腔液收集装置和购自Greiner Bio-One的口腔液收集系统。按照每个制造商的说明书收集对照唾液样品，并加标常规唾液分析中需要测定的27种违禁药物和处方药混合物。 

采用之前报道的方法^2,3，使用简单的Oasis MCX 96孔µElution板(P/N 186001830BA) 方案萃取基质中的分析物。 从每个收集装置移取并上样到样品板上的样品体积等于相同体积(<75 µL)的纯口腔液。使用双通道MRM方法（每种分析物都设有定量离子和定性离子）采集数据，并使用TargetLynx应用管理软件处理数据。

THC的化学性质与分析物组中的其他分析物差别很大，因此，需要使用不同的色谱梯度才能满足EWDTS口腔液分析指导原则中推荐的THC确认检测的2 ng/mL的cut-off值，如图1所示。  

将Oasis MCX µElution板得到的洗脱液分为两等份上样到96孔样品收集板中（700 µL圆孔，P/N 186005837）。在氮气下挥干后，分别使用两种溶剂复溶两个等分试样。其中一份等分试样使用50%乙腈复溶，该试样专门用于分析THC；另一份等分试样使用含有0.1%空白人血浆的5%乙腈复溶，用于测定所有其他化合物。图2显示了所有分析物（THC除外）的色谱分离结果，其纵坐标已放大至最大程度。  

为避免切换色谱柱，两种分析方法均采用同一根ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱(P/N 186002352)，并且使用相同的流动相，以便连续运行分析。 

由于口腔液中的分析物浓度比其他生物基质中的浓度更低，高灵敏度的Xevo TQ-S micro质谱仪与ACQUITY UPLC I-Class系统(FTN)联用非常适合这类应用。

由于药物组中存在化学性质相差极大的各类化合物，加之口腔液收集装置通常只能提供体积有限的样品，口腔液样品分析的难度极大。使用单一的Oasis MCX µElution样品处理方法和两种UPLC-MS/MS方法，能够在15 min内成功分析包括THC的混合药物组，并且药物浓度满足现行指导原则（如EWDTS指导原则）的要求。这种样品制备方法可轻松实现自动化，从而提高样品通量。

1. European Workplace Drug Testing Society Guidelines.http://www.ewdts.org (accessed 29 June 2017).
2. Danaceau et al.Direct Analysis of Opioids and Metabolites in Oral Fluid by Mixed-Mode µElution SPE Combined with UPLC-MS/MS for Forensic Toxicology.2013.沃特世应用纪要.720004838EN.
3. Lee et al.Using UPLC-MS/MS for the Quantitation of Illicit or Prescription Drugs in Preserved Oral Fluid.2016.沃特世应用纪要.720005584EN.