用于通过LC-MS/MS测定肉类和牛奶中阿凡曼菌素的QuEChERS样品前处理

本应用纪要介绍使用QuEChERS方法和LC-MS/MS技术制备并分析牛奶和碎牛肉中ppb水平的阿凡曼菌素。

优势

• 使用QuEChERS方法实现肉类和牛奶样品的简单、高通量前处理
• 使用快速简便的DisQuE样品前处理方法对复杂样品基质中的阿凡曼菌素进行高灵敏度LC-MS/MS分析
• 实现阿凡曼菌素的十亿分之一(ppb)水平检测，满足特定国家/地区的最大残留量(MRL)要求
• 使用DisQuE产品进行样品前处理符合CEN方法15662

阿凡曼菌素是一种十六元环大环内酯类药物，用作兽用抗寄生虫药。食品中这些化合物的最低允许限值根据全球安全性评估来确定。世界各地的阿凡曼菌素规定MRL各不相同，但通常都在ppb水平范围内。由于牛奶和肉类等食品具有复杂的基质，因此要对其中的阿凡曼菌素进行灵敏的检测会有一定的挑战性。 

QuEChERS是一种简单直接的样品前处理技术，需要先进行盐析液体萃取，然后进行可选的分散固相萃取(d-SPE)。利用QuEChERS方法制备样品可实现高通量和高灵敏度的食品分析。虽然QuEChERS常用于水果和蔬菜中的多残留农药分析，但它也可以用于分析家畜产品中的兽药。本应用纪要介绍使用QuEChERS方法和LC-MS/MS技术制备并分析牛奶和碎牛肉中ppb水平的阿凡曼菌素。

在本研究中针对阿凡曼菌素优化的MRM通道、锥孔电压和碰撞室能量如下所示。 

样品前处理

初步萃取(QuEChERS)

向一根50 mL离心管中加入10 mL全脂牛奶（经巴氏灭菌），或（对于肉类）加入8 g碎牛肉（80%瘦肉）和2 mL水。加入10 mL乙腈，用力振荡离心管1分钟。加入用于欧洲标准化委员会(CEN) QuEChERS方法的DisQuE袋盐（部件号：186006813），用力振摇1分钟。在4000 rpm下离心15分钟，取1 mL上清液（最上层）用于d-SPE净化。 

d-SPE净化

取1 mL上清液转移至含有150 mg硫酸镁和50 mg C₁₈吸附剂的2 mL d-SPE净化管中，用力振摇1分钟。在12000 rpm下离心5分钟，取0.5 mL样品用于LC-MS/MS分析。

测定低浓度和高浓度下各类固醇激素的回收率（表2）。通过比较在QuEChERS萃取前加标样品（预加标样品）的MRM峰面积与QuEChERS萃取后加标样品（后加标样品）的MRM峰面积来计算回收率。表3展示了各化合物计算所得的基质效应。通过比较后加标样品的MRM峰面积与使用乙腈制备的等效标准品的MRM峰面积来计算基质效应。图1和图2分别展示了分析加标低浓度阿凡曼菌素的肉类和牛奶样品获得的LC-MS/MS色谱图。

在分析全脂牛奶和碎牛肉等棘手基质中的阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素、依普菌素和莫西菌素时，使用DisQuE样品前处理吸附剂袋获得了良好的回收率。QuEChERS萃取是一种简单直接的样品前处理方法，已被证明可有效提取牛奶和肉类中的阿凡曼菌素。在LC-MS/MS分析之前结合d-SPE净化步骤有助于可靠定量复杂基质中低ppb水平的阿凡曼菌素。

• DisQuE袋(QuEChERS)方案是一种从牲畜产品中提取阿凡曼菌素的简单有效的方法。
• DisQuE样品前处理可在LC-MS/MS分析之前实现出色的样品净化，并实现较高的分析物回收率和很小的基质效应。
• DisQuE萃取与LC-MS/MS分析相结合，使用eXtended Performance [XP ] 2.5 μm色谱柱对复杂基质中的阿凡曼菌素进行了低ppb水平的定量分析，实现了可靠的检测。