用于通过LC-MS/MS测定肉类和牛奶中类固醇激素的QuEChERS样品前处理

本应用纪要介绍使用QuEChERS方法和UPLC-MS/MS技术制备并分析牛奶和碎牛肉中ppb水平的类固醇激素。

优势

• 使用QuEChERS方法实现肉类和牛奶样品的简单、高通量前处理
  
• 采用快速、简便的样品前处理过程对食品中的类固醇进行高灵敏度UPLC-MS/MS分析
• 复杂牲畜基质中的类固醇检测可达到十亿分之一(ppb)水平
• 使用DisQuE产品进行样品前处理符合CEN方法15662

孕酮和睾酮是天然存在的物质，在世界范围内用作牲畜的生长促进剂。地塞米松是一种抗炎糖皮质激素类固醇药物，通常与天然激素同时给药。这些化合物的最大残留量(MRL)要求在全球范围内各不相同，但通常都在低ppb水平范围内。在这些浓度条件下，由于样品本身的复杂性，分析牛奶和肉类等产品中的类固醇通常很困难。 

QuEChERS是一种简单直接的样品前处理技术，需要先进行盐析液体萃取，然后进行可选的分散固相萃取(d-SPE)。在食品分析中，利用QuEChERS方法制备样品可实现大通量和高灵敏度。虽然QuEChERS常用于水果和蔬菜中的多残留农药分析，但它也可以用于分析牲畜产品中的类固醇。本应用纪要介绍使用QuEChERS方法和UPLC-MS/MS技术制备并分析牛奶和碎牛肉中ppb水平的类固醇激素。

在本研究中针对类固醇激素优化的MRM通道、锥孔电压和碰撞室能量如下所示。

样品前处理

初步萃取(QuEChERS)：

向一根50 mL离心管中加入10 mL全脂牛奶（经巴氏灭菌）或10 g碎牛肉（85%瘦肉）。加入10 mL乙腈，用力振荡离心管1分钟。加入用于欧洲标准化委员会(CEN) QuEChERS方法的DisQuE袋盐（P/N：186006813），用力振摇1分钟。在4000 rpm下离心3分钟，取1 mL上清液（最上层）用于d-SPE净化。 

d-SPE净化

取1 mL上清液转移至含有150 mg硫酸镁、50 mg PSA吸附剂和50 mg C₁₈吸附剂（P/N：186004830）的2 mL d-SPE净化管中，用力振摇1分钟。在4000 rpm下离心3分钟，取0.5 mL样品用于UPLC-MS/MS分析。

测定低浓度和高浓度下各类固醇激素的回收率（表2）。通过比较在QuEChERS萃取前加标样品（预加标样品）的MRM峰面积与QuEChERS萃取后加标样品（后加标样品）的MRM峰面积来计算回收率。表3展示了各化合物计算所得的基质效应。通过比较后加标样品的MRM峰面积与使用乙腈制备的等效标准品的MRM峰面积来计算基质效应。图1和图2分别展示了分析加标低浓度类固醇激素的肉类和牛奶样品获得的UPLC-MS/MS色谱图。

讨论

在分析全脂牛奶和碎牛肉等棘手基质中的孕酮、地塞米松和睾酮时，使用DisQuE袋进行样品前处理获得了良好的回收率和重现性，且基质效应影响很小。QuEChERS萃取是一种简单直接的样品净化方法，已被证明可有效提取牛奶和肉类中的类固醇激素。在进行灵敏的UPLC-MS/MS分析之前，使用d-SPE进行样品净化的附加步骤可以更准确地回收和定量复杂样品中的类固醇，从而实现低ppb范围内的检测。

• DisQuE袋(QuEChERS)可有效萃取牲畜产品中的类固醇激素。
• DisQuE分散样品前处理是一种简单直接的技术，只需少量的用户培训即可实现高通量的复杂基质样品前处理。
• DisQuE样品前处理方法与UPLC-MS/MS相结合，能够对牲畜产品中低ppb水平的类固醇进行灵敏的定量分析。