Colonnes GTxResolve Slalom

Séparations comparables à celles sur gel, à la vitesse de l’UPLC

Comprendre l’identité, la pureté et la forme structurale des plasmides est essentiel pour la production de protéines recombinantes à grande échelle et la transcription in vitro (IVT) de l’ARNm. Traditionnellement, les plasmides digérés par une enzyme de restriction sont analysés par électrophorèse sur gel d’agarose, un protocole qui peut s’avérer laborieux, chronophage et limité en termes de résolution. La chromatographie slalom permet d’obtenir rapidement une cartographie des enzymes de restriction afin d’analyser des produits de digestion volumineux en moins de cinq minutes par injection. Cette nouvelle méthode de séparation délivre un profil similaire à celui obtenu sur gel, utilisé pour la cartographie de restriction afin de confirmer l’identité des échantillons d’ADN. L’utilisation d’une plateforme LC permet également la collecte de fractions pour une caractérisation plus approfondie des produits digérés, offrant une alternative à la découpe des bandes sur gel.

Analyse des impuretés d’ARNdb

L’ARNdb est une impureté critique générée lors de la synthèse par transcription in vitro (IVT) de médicaments et vaccins à base d’ARNm. Ce sous-produit indésirable peut déclencher des réponses immunitaires puissantes, entraînant une réduction de l’efficacité thérapeutique et compromettant la sécurité des patients. La quantification exacte des impuretés d’ARNdb est essentielle pour respecter les exigences réglementaires et garantir l’innocuité du produit. Cette application illustre l’utilisation de la colonne GTxResolve Slalom de Waters, MaxPeak Premier 2,5 µm, offrant une haute résolution et sensibilité pour l’analyse de l’ARNdb en exploitant les variations des temps de relaxation dans un champ de cisaillement contrôlé.

Topologie des plasmides

L’ADN plasmidique (ADNp) est un composant fondamental de nombreux produits biothérapeutiques, notamment les thérapies géniques et les vaccins à ARNm. Les préparations plasmidiques contiennent souvent plusieurs isoformes, dont les formes superenroulées, circulaires ouvertes et linéaires. La présence de plasmides circulaires est indésirable pour la transcription in vitro (IVT), car la transcription peut dépasser le site de terminaison prévu (« readthrough »), générant des transcrits aberrants. 

Chaque isoforme possède des propriétés biologiques distinctes ; il est donc crucial de séparer et de caractériser précisément ces isoformes afin d’assurer la qualité, l’intégrité et la cohérence du processus IVT, ainsi que l’innocuité et l’efficacité du médicament. Cette application illustre la séparation à haute résolution, rapide et exacte des isoformes plasmidiques à l’aide de la colonne GTxResolve 250 Å Slalom de Waters, MaxPeak Premier 2,5 µm.