Biokonjugate spielen eine zunehmend wichtige Rolle bei Therapeutika der nächsten Generation, da sie durch gezieltes Molekulardesign die präzise Zufuhr hochwirksamer Wirkstoffe ermöglichen. Die Optimierung komplexer, heterogener Moleküle erfordert robuste Analysetechnologien, um kritische Attribute wie Konjugationsstellen, Wirkstoffverteilung und die gesamte Molekülheterogenität vollständig zu charakterisieren.
Auf dem Weg der biokonjugierten Moleküle von der Entdeckung zur Kommerzialisierung stellen ihre strukturelle Vielfalt und Komplexität erhebliche analytische Herausforderungen dar. Eine umfassende Charakterisierung ist unerlässlich, um Sicherheit, Wirksamkeit und eine konsistente Produktqualität zu gewährleisten.
Waters bietet zweckbestimmte Lösungen, die tiefe Einblicke in die Struktur und Qualität von Biokonjugaten liefern. Vereinfachen Sie die Analyse komplexer Moleküle und beschleunigen Sie die Charakterisierung und Überwachung kritischer Qualitätsattribute, unabhängig von der Struktur Ihres Biokonjugats.
Fallstudie: So unterstützt Waters die Entwicklung neuartiger Therapien
Beschleunigen Sie den Weg von der Probenanalyse bis zur Entscheidungsfindung mit waters_connect für Biopharmazeutika – mit maßgeschneiderten Workflows für die Biokonjugat-Analyse sowie der integrierten, automatisierten Berechnung von Konjugationsverhältnis und -verteilung.
Erzielen Sie hochwertige LC-basierte Analysen und bestimmen Sie das DAR von Cystein-konjugierten und stark hydrophoben ADCs mit den Waters Protein-Pak Hi Res HPLC-Säulen für die hydrophobe Interaktionschromatographie (HIC) für schnelle, effiziente Trennungen.
Umkehrphasensäulen für Biokonjugate und Antikörper-Wirkstoff-Konjugate mit MaxPeak HPS, wie die ACQUITY und XBridge Premier Protein BEH C4 Säulen, wurden speziell zur Minimierung sekundärer Wechselwirkungen zwischen ADCs und Säulenhardware entwickelt. Sie sind für die Analyse von Lysin-konjugierten ADCs geeignet. Im Gegensatz zu Cystein-konjugierten ADCs sind die Disulfidbindungen innerhalb der Kette, die die Verknüpfungen zwischen den schweren und leichten Ketten des mAb für die Lysin-konjugierten ADCs aufrechterhalten, intakt. Daher ist die Umkehrphasenchromatographie für die Analyse von Lysin-konjugierten ADCs geeignet, wenn die Linkerchemie bei einem sauren pH-Wert nicht labil ist. Darüber hinaus bietet Waters Umkehrphasensäulen mit Solid-Core-Partikeltechnologie an, wie z. B. BioResolve RP mAb Polyphenyl für die Intakt- und Untereinheitenanalyse, um die Lokalisierung verknüpfter Wirkstoffe auf Domänenebene zu bestimmen.
Eliminieren Sie die Notwendigkeit der Erstellung mehrerer mobiler SEC-Eluent-Phasen für verschiedene Proteine, indem Sie eine Plattformmethode mit phosphatgepufferter Salzlösung (d. h., PBS) verwenden, um mit den SEC-Säulen von Waters durchweg genaue Aggregat-, Monomer- und Fragmentdaten zu erhalten. Darüber hinaus ist es bei Biokonjugaten, die hydrophob sein können, was zu unerwünschten sekundären Wechselwirkungen führt, nicht erforderlich**, bei Verwendung der** MaxPeak Premier Protein SEC-Säulen und ihrer PEO-gebundenen BEH-Partikel ein organisches Lösungsmittel hinzuzufügen.
Messen Sie Ladungsvariantenprofile von Cystein- und Lysin-gebundenen ADCs mit der BioResolve SCX mAb Säule und den BioResolve CX pH-Pufferkonzentraten für Salz- oder pH-Gradienten mit minimalen sekundären Wechselwirkungen bei der optischen Detektion präzise. Für strukturelle Erkenntnisse mit Massenspektrometrie im Ionenaustausch machen unsere MS-kompatiblen Puffer, die IonHance CX-MS pH-Pufferkonzentrate, eine Online-IEX-MS mit hochreinen, flüchtigen, für die Massenspektrometrie geeigneten Puffern möglich.
Antikörper-Oligonukleotid-Konjugate (AOCs) werden häufig in der Proteindiagnostik verwendet und sind ein vielversprechendes Therapeutikum für die zielgerichtete Zelltherapie. Die negative Nettoladung eines AOC nimmt mit jeder zusätzlichen Konjugationsstelle zu, was zu einer erhöhten Retention auf einem Anionentauscherharz führt. Die GenPak FAX Säule enthält ein schwaches Anionenaustausch-Sorbens, das eine kontrollierte Retention und eine einzigartige Selektivität für Protein- und Oligonukleotidproben aufweist. Aktuelle Applikationsarbeiten zeigen, dass AEX mit MALS gekoppelt werden kann, um Informationen zum absoluten Molekulargewicht zu generieren.
Hydrophile Interaktionschromatographie (HILIC) wurde häufig zur Trennung kleiner polarer Verbindungen genutzt, aber ihre Anwendung bei großen Biomolekülen war, abgesehen von freigesetzten Glykanen, überraschend begrenzt. Mit den weitporigen Glykoprotein-Säulen von Waters ist es jetzt möglich, mit HILIC bisher unerreichbare Informationen aus intakten Proteinen (mit oder ohne Glykosylierung), Proteinfragmenten und komplexen, freigesetzten Glykanen zu erhalten.
Die Waters PeptideWorks Kits für den tryptischen Proteinverdau für manuelle oder automatische Workflows liefern Ihrem Labor auf einzigartige Weise hocheffiziente, reproduzierbare Peptid-Maps in weniger als 2,5 Stunden – 4-mal schneller als durchschnittliche selbst entwickelte Methoden. Erzielen Sie einen 30-minütigen Verdau bei einem Enzym-Peptid-Verhältnis von 1:5, eine 78%ige Reduktion von Fehlspaltungen und eine 98%ige Reduktion kontaminierender Autolysepeaks. PeptideWorks ist ideal für die Bestimmung der Wirkstoff-Konjugationsstellen, die Charakterisierung der Proteinstruktur, die Identifizierung von Proteinen und die Überwachung von Proteinmodifikationen, einschließlich posttranslationaler Modifikationen.
Entdecken Sie eine völlig neue, optimierte, schnelle und hochempfindliche Methode zur Profilerstellung von N-Glykanen an ADCs mit dem GlycoWorks Kit. Erzielen Sie eine beispiellose Fluoreszenz- und massenspektrometrische Leistung bei der Analyse von freigesetzten N-Glykanen und maximieren Sie gleichzeitig die Produktivität mit einer Lösung, die auf dem Waters Andrew+ Pipettierroboter automatisierbar ist. In nur drei einfachen Schritten und in lediglich 30 Minuten vereinfacht das GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glykan-Kit die komplizierte und zeitaufwändige Probenvorbereitung.
Vereinfachen und beschleunigen Sie den Proteinverdau mit den ProteinWorks eXpress Digest Kits. Vordosierte, chargenrückverfolgbare Reagenzien und standardisierte Protokolle für die genaue, präzise und empfindliche LC-MS-Quantifizierung von Proteinen, einschließlich ADCs, in Plasma und Serum. Erzielen Sie beispiellose Leistung und Flexibilität für einen reproduzierbaren Proteinverdau mit Kits, die für verschiedene Workflows, einschließlich Protein-Bioanalyse/DMPK, optimiert sind.
Beschleunigen Sie die Messungen von Antikörpertitern mit den Waters BioResolve Protein A Affinity Säulen mit MaxPeak Premier Technologie. Diese Hochleistungssäulen helfen Ihnen, eine bis zu 7-mal höhere Empfindlichkeit zu erreichen, was eine schnellere Entscheidungsfindung und eine bessere Prozesskontrolle ermöglicht. Diese Säulen erschließen zudem fortschrittliche analytische Workflows, einschließlich vereinfachter Direct Connect 2D-ProA-SEC- und ProA-MS-Methoden. Optimieren Sie Ihre Prozesse und gewinnen Sie beispiellose, tiefgreifende Einblicke in Ihre Antikörper.
Optimieren Sie die Probenvorbereitung für quantitative LC-MS-Analysen mit verifizierten Workflows, die Ihnen dabei helfen, die Variabilität zu minimieren, die Rückverfolgbarkeit zu verbessern und den Methodentransfer zu vereinfachen.
Optimieren Sie die Produktivität und den Erfolg Ihres Labors mit Waters Global Services, um eine optimale Systemleistung aufrechtzuerhalten, Ausfallzeiten zu minimieren, Applikationsprobleme zu lösen und strenge Compliance-Anforderungen zu erfüllen.
Maximieren Sie Ihre Ressourcen und minimieren Sie das Risiko mit den Zahlungsoptionen von Waters Capital, einschließlich der Aufrüstung veralteter Geräte, der Inanspruchnahme von individuellem Support und der Bündelung von Dienstleistungen in einer monatlichen Zahlung.
Cystein-konjugierte ADC-Analyse mittels HIC. Die Wirkstoffverteilung wurde für drei verschiedene, Cystein-konjugierte ADC-Proben mit zunehmender Wirkstoffladung bestimmt.
DSC-ADC-Ergebnisse mit Gauß-Anpassung, die mit dem BioAccord System für einen nativen mAb (oben) und einen mAb mit hohem DAR (unten) erfasst wurden.
Schnelle SEC-Analyse von Trastuzumab-Emtansin (A) und Bevacizumab (B), durchgeführt auf einer XBridge Premier Protein SEC 250 Å 2,5 µm 4,6 × 150 mm Säule. Mobile Phase: 1x PBS, pH-Wert 7,4, Flussrate F = 0,7 mL/min, Temperatur T = 25 °C, injiziertes Volumen 1 μL, Detektion: 280 nm (UV).
Vergleich des Peptid-Mappings (UV-Chromatogramme) von konjugiertem und unkonjugiertem Trastuzumab
Oben: Trypsinverdau eines Trastuzumab-Biosimilars.
Unten: Trastuzumab-Emtansin (Kadcyla), Trypsinverdau des Antikörper-Wirkstoff-Konjugats.
Bei beiden tryptischen Verdauungen wurden RapiZyme Trypsin und das PeptideWorks Tryptic Protein Digestion Kit mit einer Injektion von 100 µL (~ 10 µg) auf einer XSelect Premier Peptide CSH C18 Säule (2,5 µm, 2,1 × 150 mm) verwendet. Zusätzliche Peaks im Kadcyla-Chromatogramm (unten) im Vergleich zu unkonjugiertem Trastuzumab (oben).