L’échange d’anions (AEX) est une technique fondamentale pour la séparation des thérapies géniques, y compris les oligonucléotides antisens, le siRNA, l’ARN simple guide (ARNsg) CRISPR, les complexes ribonucléoprotéiques, l’ARNm, l’ADN plasmidique et les capsides viraux. Le mécanisme d’échange d’anions est basé sur les interactions électrostatiques entre les analytes chargés négativement et la phase stationnaire chargée positivement. Plus une biomolécule est chargée négativement, plus elle s’adsorbe sur la résine de la colonne. Les analytes se séparent et s’éluent en fonction de la densité de charge lorsque la force ionique ou le pH de la phase mobile change.
Optimisez les conditions de votre analyse en choisissant la colonne et l’étalon AEX de Waters les mieux adaptés à votre workflow.
Les colonnes Gen-Pak FAX (4.6 x 100 mm) de Waters procurent la plus haute résolution disponible pour l’analyse d’acides nucléiques par HPLC à échange d’anions. La colonne Gen-Pak FAX de Waters contient un échangeur anionique faible à base de résine non poreuse à fonction DEAE. Elle contient des particules de 2,5 µm et est parfaitement adaptée aux applications analytiques et micropréparatives.
Les colonnes Protein-Pak Hi Res Q (4.6 x 100 mm) à échange d’ions (IEX) de Waters améliorent la caractérisation des protéines recombinantes, des anticorps monoclonaux et autres composés biologiques. De par leur grande capacité de liaison et leur surface non poreuse, ces particules assurent une excellente résolution des molécules chargées, et une analyse plus rapide que les colonnes d’échange d’ions poreuses classiques.
Dans des conditions natives, les oligonucléotides et les acides nucléiques plus longs ont un squelette de phosphate polyanionique chargé négativement. Cette fonctionnalité fait des acides nucléiques un candidat idéal pour l’AEX. La colonne Gen-Pak FAX de Waters comprend une résine échangeuse d’anions faible non poreuse de 2,5 µm conçue pour les acides nucléiques, depuis les oligonucléotides de synthèse à l’ARNm.
La colonne Protein-Pak Hi Res Q contient une résine polymérique non poreuse avec une fonction amine quaternaire. Elle permet une multitude d’applications d’échange d’anions et de cations (SAX), notamment l’analyse de l’intégrité de l’ARNm, la formation de complexes d’ARN simple guide (ARNsg) CRISPR et de ribonucléoprotéines, la quantification des isoformes de l’ADN plasmidique et l’analyse de l’encapsidation vide/pleine des thérapies géniques à vecteur viral.
On a observé que l’ARNsg était présent en léger excès après la formation d’un complexe avec la protéine Cas9. La formation du complexe a été suivie à la fois à 260 (noir) et 280 nm (rouge).
Chromatogrammes UV (260 nm) obtenus pour une échelle d’oligo dT utilisant différentes colonnes AEX. Les séparations par gradient salin ont été réalisées à 30 °C avec un débit de 0,72 ml/min, une phase mobile tampon Tris pH 8 de 20 mM et un gradient de 10 minutes allant de 300 à 600 mM NaCl.
Séparation des isoformes plasmidiques (L, O, SC) du ΦX174 sur une colonne Protein-Pak Hi Res Q de Waters. 20 mM Tris pH 7,4, 1,69-1,75 M chlorure de tétraméthylammonium en 10 min. Débit : 0,4 mL/min.
Quantification du pourcentage de capsides vides dans différents mélanges de capsides vides et pleines à l’aide de la méthode AEX optimisée.
Séparations par échange d’ions de l’ARNm Cas9 (A) et de l’ARNm EPO (B) à l’aide d’une colonne AEX, d’une phase mobile tampon Tris et d’un gradient de chlorure de sodium à des températures de colonne différentes allant de 30 à 60 °C.
Séparations par échange d’ions de l’ARNm Cas9 (A) et de l’ARNm EPO (B) à l’aide d’une colonne AEX, d’une phase mobile tampon Tris et d’un gradient de chlorure de sodium à des températures de colonne différentes allant de 30 à 60 °C.
