肽分离初学者指南

术语

HPLC指数 – 如Browne、Bennet和Solomon所述,该指数可在使用TFA:水:乙腈作为缓冲液体系从C18 μBondapak色谱柱上洗脱肽时预测所需的乙腈比例。

被动分流器 – 用于按指定分流比连续对制备级流量进行采样的装置;可控制质谱引导的纯化中的检测器信号。

补偿溶剂 – 在质谱引导的纯化系统中,用于稀释分流自制备级流量的样品并将其输送至检测器的溶剂。

侧链保护基团 – 连接到氨基酸侧链上,用于防止侧链在肽合成过程中与其它分子发生反应的有机分子。

单同位素质量数 – 采用分子中各元素丰度最高的同位素质量数计算得到的质量数。

等度 – 流动相组成在分离过程中保持恒定的色谱分析方法。

电荷态 – 质谱仪基于质荷比(m/z)执行分析,其中z即为电荷态。其计算方法是将同位素间的分子实际质量数差除以1 Da(同位素间的理论质量数差)。
单电荷 m/z = (M+H)/1

双电荷 m/z = (M+2H)/2

n电荷 m/z = (M+nH)/n

多电荷离子的同位素峰之间相差1/n Da(例如双电荷离子的同位素峰间隔为0.5 Da)。多电荷离子扩展了质谱仪的质量数范围。

电离 – 使得分子通过得失电子而带电的过程。

电喷雾电离 – 一种大气压电离技术,该技术几乎不产生碎片离子,非常适用于分析极性化合物和生物分子。

发色团 – 可吸收特定频率的光的分子基团。

反相色谱 – 所用流动相的极性强于色谱柱填料极性的一类分离方法,该方法基于化合物与非极性固定相之间的相互作用分离化合物。

分段梯度 – 保持梯度平缓部分(即梯度聚焦部分)前后的梯度斜率不变,从而使上述分离阶段的色谱图保持不变的分离方法。

分离度 – 两色谱峰的宽度与其之间的距离之比。

分流比 – 在质谱引导的纯化过程中,从样品流中连续“取出”并进行稀释之后送入检测器的样品量。

固相肽合成 – 将C端起始氨基酸连接到固定支撑物上,按照序列添加氨基酸以延长肽链,从而构建目标肽的过程。

硅醇 – 硅胶基质色谱柱填料上的一种化学基团,可与样品发生相互作用。

离子交换色谱 – 利用表面键合带电官能团的色谱柱分离化合物的色谱方法。

连续数据 – 显示质谱图中所有信号的完整分布曲线。

裂解 – 固相肽合成过程中将肽从树脂上去除的操作。

流动相 – 用于从色谱柱上洗脱化合物的溶剂。

流动相改性剂 – 混入色谱流动相中,用于改善分离效果的添加剂。

平缓梯度 – 单位色谱柱体积内有机溶剂比例变化速率较慢的分离方法。

平均质量数 – 根据同位素组成确定的离子或分子质量数。

去保护 – 去除氨基酸侧链保护基团,在固相肽合成过程中也指去除N-端肽保护基团。

去热原 – 色谱柱清洁步骤,使用1 M氢氧化钠去除可能污染终产物和引发过敏样反应的化合物(即多糖)。

色谱柱体积 – 色谱柱柱体内部的体积。

上样量 – 可进样至特定规格色谱柱的化合物量。

疏水 – 不易溶于水、不易与水混溶或不易被水浸润。

死体积 – 即系统体积。

缩放 – 在分离效果保持不变的前提下,将方法在不同规格色谱柱之间进行转换的过程。

梯度聚焦 – 仅针对产物制定的梯度,具体是将上样时的低溶剂强度迅速提高至产物峰预计洗脱浓度以下5%。分离肽时,梯度中平缓区段的最佳斜率约为单位柱体积变化0.25%~0.33%。肽产物洗脱后,用高浓度有机溶剂冲洗色谱柱,然后在初始条件下重新建立平衡。

体积排阻色谱 – 根据化合物在溶液中的大小对其进行分离的色谱技术。

系统体积 – 即死体积或延迟体积。

线性梯度 – 流动相组成在定义的一段时间内会发生变化的色谱分析方法。

斜率 – 梯度分离过程中单位色谱柱体积内有机溶剂组成的变化速率。

延迟体积 – 色谱系统中,从梯度混合处到色谱柱柱头的体积。

液相肽合成 – 在溶液中通过有机合成反应生成肽的过程。短肽段可缩合形成长肽序列。

载量 – 载样量;与色谱柱体积直接成正比。

质心 – 经过处理的连续数据,显示质谱图中每种离子分布的单一中心点,并且在质谱图中以棒状图的形式显示。

主动分流器 – 按照用户设定的分流比对制备级流量进行采样,通过这种方式来控制质谱检测器信号的装置。然后由补偿溶剂对采集的样品进行稀释并输送至检测器。

柱头稀释 – 通过在色谱柱柱头处使用强溶剂稀释样品来提高载量、改善分离度、延长色谱柱寿命和提升LC系统稳定性的专利进样技术。

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