UPLC入门指南

前言

2004年,随着超高效液相色谱的推出,分离科学发生了革命性的变化[UPLC®,超高效液相色谱技术]。在色谱设备和色谱柱技术上取得了显著的进步,使得液相色谱的分离度、分离速度和灵敏度显著提高。在颗粒技术和色谱设备设计上的同步革新,第一次力图满足并克服分析实验室中存在的挑战。这能够帮助分析科学家取得更多成功,工作更加富有成效。

40多年来,采用减小固定相颗粒大小,提高色谱分离的效率。目前,LC技术进入了一个停滞阶段,由于仪器谱带扩展的负面影响和系统压力范围的限制,减小颗粒大小的好处无法完全实现。

图1:ACQUITY UPLC®系统。

ACQUITY UPLC系统[图1]消除了这些障碍,能够使用较小颗粒[1.7–1.8 μm]装填色谱柱,并实现其理论性能,当压力高达1030 Bar[15,000 psi]时,能精确输送流动相,因此ACQUITY UPLC系统将色谱性能提高到了新的水平。

UPLC技术同时提高了色谱分离度、灵敏度和分离速度。无论分离目的是要实现超高速分析,维持分离度的同时增加通量,减少分析时间的同时提高分离度,还是实现超高分离度,ACQUITY UPLC系统均能满足方法上的要求[图2]。

图2:多功能的 UPLC 技术–实现分离度、灵敏度和分离速度的提高。

该入门指南将指导现有、潜在和最新的UPLC用户,理解UPLC技术如何工作,怎样使用UPLC和UPLC如何才能提供最有效的结果。

 

 

小颗粒填料的应用前景 如果我们以基本常识考虑色谱分离度,那么需要考察两峰的宽度,与峰之间距离[tR,2 – tR,1]的比值。如果我们能够将峰变更窄或能进一步分离,我们将能够提高分离度。
性能改善带来的结果 在上面的章节中,对减小色谱颗粒的好处和最小化系统的谱带展宽[包括色谱仪和色谱柱]进行了说明。UPLC技术通过最小化系统的谱带展宽,在较短的时间内实现较高效的分离,便于色谱性能的提高,由此获得了更佳的数据质量。但是,除带展宽不是决定性能的唯一因素。色谱仪的有效压力也起到巨大的作用。
使用UPLC技术提高生产率 通过本入门教程了解的色谱原理和色谱应用方法,可明显发现,为了使分离性能最大化,不仅仅需要考虑小的填料和较高的压力。为了实现2 μm颗粒柱的色谱效益,这些色谱柱必须在特别设计的色谱仪上使用,以耐受较小颗粒所产生的压力,同时将谱带展宽最小化。常规HPLC系统不能实现这一点。
谱带、色谱峰和谱带展宽 每一特定被测物谱带是由被测物分子组成的。带中心处的被测物分子浓度最高;而带的前部和尾部边缘浓度逐渐降低,作为样品带与流动相的交界。